肝再生增强因子在HBV相关慢加急性肝功能衰竭中的表达及其启动子区基因多态性分析

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研究目的:1、了解HBV感染后不同程度肝功能损害患者ALR血清浓度变化及其临床意义。2、获得汉族人群ALR启动子区的SNP位点基因型。3、筛选出与ACLF有关启动子区SNP位点。4、检测SNP不同基因型间ALR血清浓度差异。对象方法:病例收集于2011年至今泸州医学院感染科门诊及住院的乙肝患者,包括慢性乙肝轻度(n=110例)和ACLF组(n=138例)以及健康对照组(n=120名),同时运用如下方法对各组标本进行如下实验:(1)ELISA检测:使用ELISA法检测各组ALR浓度,多组之间采用单因素方差分析,两组之间采用t检验。(2)全血DNA提取、电泳、PCR及测序:待检的EDTA抗凝全血标本,置于37℃温箱迅速溶解,使用QiAampDNA Blood试剂盒提取全基因组DNA,并用紫外透射仪检测浓度与纯度,随之选取DNA标本进行PCR扩增,PCR产物送introvgen公司测序。(4)通过chromas软件读序列直接判定SNP基因型,卡方检验比较病例组和对照组之间SNP基因型频率统计学差异;秩和检验分析SNP不同基因型与ALR表达的关系;LD筛选与ACLF有关的ALR启动子区SNP位点,计算连锁不平衡系数D与D’值. D值代表实际情况中单体型分布频率与单体型分布频率之间的差异。D’值则是经标准化的D值,范围在0到1之间;D’=0表示位点之间不存在连锁;D’=1表示存在完全连锁;∣D’∣<l表示存在连锁不平衡。结果:1、 ALR水平在ACLF组明显高于健康对照组(2.58±1.67vs0.72±0.29,p<0.01)。慢乙肝轻度组ALR水平与健康对照组相比无明显统计学差异(0.74±0.46vs0.72±0.29,P=0.813),在ACLF血清ALR水平在生存组明显高于死亡组(7.78±1.75vs2.10±1.50,t=7.479,p<0.01)。多因素logistic分析结果表明:在校正了性别、年龄的混杂因素后,P=0.000,OR值为0.003,95%(0.000,0.034)说明高浓度ALR对于生存组患者是保护性因素,提示ACLF患者血清高ALR浓度与较好预后有相关性。2、ALR基因启动子区SNPs位点在138名ACLF患者,110例慢乙肝轻度患者和120名健康献血员正常对照中成功进行了分型,结果显示:各ALR的SNP位点在健康对照组、慢乙肝轻度组及ACLF组各基因型分布无明显统计学意义(P>0.05),ALR-847A/G、-393A/G和-80G/A位点基因型在ACLF组和健康对照组中均有明显差异(P<0.05)。经多因素Logistic回归分析校正年龄、性别等因素后:ALR-80G/A位点与ACLF显著关联。-80G/A为ACLF的影响因素,GA基因型携带者为ACLF患病的危险因素,携带GA基因型的个体患病的可能性为GG基因型携带者的1.788倍(P=0.028)3、ACLF患者SNP各突变位点不同基因型ALR值经秩和检验分析,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:我们通过病例对照研究证实了ALR基因多态性与ACLF的关联,ACLF患者ALR浓度与其它组相比明显升高,血清ALR高水平预示ACLF预后良好。-80G/A位点与ACLF显著关联,GA基因型与其它基因型相比,GA基因型的个体对ACLF易感性显著升高。ACLF的ALR启动子区SNP不同基因型间ALR血清浓度无明显统计学差异。
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