基于亲疏水性平衡的聚物引入对质粒DNA转染的改善

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聚(乙烯亚胺)(PEI)是一种正电荷密度高、质子缓冲能力强的聚阳离子非病毒基因载体材料,高分子量的PEI通常有较高的转染效率,但其毒性也比较明显,而低分子量的PEI毒性较低,但其转染效率也相对较低。本文通过可逆加成链转移自由基聚合制备了两种特定结构的寡聚物,通过非静电自组装的方式将寡聚物引入到低分子量的PEI(Mw=10 kDa)基因载体体系中以改善基因转染,并通过石英晶体微天平(QCM)测试了寡聚物与质粒DNA(pDNA)、PEI以及AD-293细胞间相互作用。首先,合成具有亲疏水性平衡结构的嵌段共聚物P(HEMA-b-NIPAM)和梳形无规共聚物P(PEGMA-co-NIPAM),并利用核磁和凝胶色谱表征了聚合物的结构与相对分子量。体外转染实验结果表明:更加疏水性的寡聚物P(HEMA-b-NIPAM)引入到PEI基因转染体系中,可以明显改善基因转染效果,而寡聚物P(PEGMA-co-NIPAM)对于基因转染无明显改善。然后,通过凝胶电泳测试了寡聚物P(HEMA-b-NIPAM)的引入对于PEI压缩和保护DNA能力的影响,从透射电镜的图片可以看出P(HEMA-b-NIPAM)、pDNA和PEI的三元复合物形貌相对pDNA和PEI的二元复合物更加规整,随后利用动态光散射测试了所形成的三元复合物的粒径和电势。最后,通过细胞毒性实验测试了三元复合物的细胞毒性,利用流式细胞仪测试了转染效率。结果表明P(HEMA-b-NIPAM)、pDNA和PEI所形成的三元复合物在基因转染和基因治疗上有很好的应用前景。
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