【摘 要】
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目的探讨胆红素对SD大鼠脑干神经元突触小体游离钙离子浓度的影响,以及甘氨酸熊脱氧胆酸(GUDCA)的拮抗作用。方法采用出生后7-14天的SD大鼠40只(雌雄不拘),随机分成三大组,分别为对
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目的探讨胆红素对SD大鼠脑干神经元突触小体游离钙离子浓度的影响,以及甘氨酸熊脱氧胆酸(GUDCA)的拮抗作用。方法采用出生后7-14天的SD大鼠40只(雌雄不拘),随机分成三大组,分别为对照组(A组),胆红素组(B组,胆红素浓度分别为0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L),以及GUDCA干预组(C组胆红素浓度同B组,GUDCA50μmol/L)。SD大鼠称重并麻醉(乙酰丙嗪,肌注,4.5mg/kg)、迅速断头、取脑干,用蔗糖密度梯度离心法(0.32mol/L、0.8mol/L、1.2mol/L)提纯脑干突触小体;以不含Ca2+、Mg2+、酚酞的HBSS分别洗涤、离心三次后,用钙离子荧光探针Oregon green488BAPTA-1/AM10μmol/L染色,室温下孵育40min,再以HBSS分别洗涤、离心三次,再次离心,加适量HBSS获得富有活性的突触小体悬浮液(BCA法控制蛋白浓度)。采用光镜及透射电镜观察突触小体活性,并以共聚焦激光扫描显微镜观察不同条件下突触小体的形态,以及突触小体[Ca2+]i荧光强度的实时变化。结果通过上述方法可以获得活性良好的SD大鼠脑干神经元突触小体;对照组突触小体[Ca2+]i的荧光强度稍微增加;在0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L的胆红素的作用下,胞内钙的荧光强度迅速升高,并随浓度增加而增加;在胆红素和GUDCA的共同作用下,胞内钙荧光强度显著降低。结论胆红素能使突触小体内的钙超载,并与浓度呈正相关;GUDCA能够显著抑制胆红素所致的突触小体内的钙超载。GUDCA是有效的、潜在的治疗新生儿胆红素脑病的治疗药物。
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