【摘 要】
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目的:根据低频超声破坏微泡造影剂可以增加微血管内皮细胞间隙及细胞膜通透性的原理,观察靶向超声微泡造影剂联合低频超声对肝癌细胞的作用,探讨一种新的受体介导基因转移技术,为
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目的:根据低频超声破坏微泡造影剂可以增加微血管内皮细胞间隙及细胞膜通透性的原理,观察靶向超声微泡造影剂联合低频超声对肝癌细胞的作用,探讨一种新的受体介导基因转移技术,为靶向超声微泡造影剂用于肝癌的基因治疗寻找理论根据和潜在价值。
方法:1、通过台盼蓝染色实验观察细胞活性以确定适宜的超声辐照条件及微泡浓度。2、复合超声微泡造影剂的合成及基因转染辐照实验:将c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)、荧光素标记的肝特异性配体半乳糖基化多聚赖氨酸(G-PLL)与载体SonoVue微泡三者相结合,用超声介导微泡破裂的方法促使c-myc ASODN转染于人肝癌细胞SMMC-7721,实验分4组(每组5例):A组:空白对照组,培养瓶内仅有SMMC-7721细胞;B组:加入c-myc ASODN与G-PLL耦联物,无微泡及超声照射。C组:c-myc ASODN+微泡+超声照射。D组:c-myc ASODN+G-PLL+微泡+超声照射。实验结束后24h收集细胞,利用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝癌细胞c-myc mRNA的表达情况,观察c-myc ASODN对肝癌细胞的作用。
结果:RT-PCR显示实验组(治疗基因c-myc ASODN+G-PLL+微泡+超声)c-mycmRNA基因表达水平显著降低(P<0.01);台盼蓝染色实验结果显示,1.5 mHz脉冲波,10%工作周期,机械指数1.0 w/cm2、60 s的超声介导10%SonoVue微泡对细胞活性无明显影响。
结论:受体介导的靶向超声微泡造影剂在超声波作用下能有效地促进目的基因在肝癌细胞中的表达,进一步为肝癌基因治疗提供了新的途径。
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