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目的:
本实验采用体外培养的方法,于完全缓解的急性髓系白血病患者骨髓中分选出CD34+细胞,同加味青蒿鳖甲汤含药血清联合细胞因子进行培养,观察含药血清对髓系MRD-L患者CD34+细胞源DC诱导过程中对TNF-α、sTNF-αR的影响。
方法:
制备中药含药血清。从急性髓系白血病患者完全缓解后的骨髓中分离纯化得到CD34+细胞,进行体外扩增,达到一定数量后,用含10%FBS的RPMI1640培养液调整CD34+细胞浓度,移至6孔培养板中,与不同浓度中药含药血清联合细胞因子(GM-CSF+IL-4+IFN-α+TNF-α)共同培养9天,3日换液1次,观察细胞生长,9天后流式细胞仪检测DC表面免疫标志CD80、CD86、CD83、CD1a、HLA-DR的表达。分别在0、6、9天检测培养液上清中TNF-α、sTNF-αR的含量。
结果:
DC的形态:倒置显微镜下观察,培养前3天细胞呈半悬浮生长,体积较小、形圆;4-6天细胞成簇并形成较多集落,大部分细胞悬浮,体积较前增大,形态呈星状;诱导培养第7-9天可见大而精细的突起,突起细而长,呈刺状,细胞具有典型的DC形态学特征,表达成熟DC的特异性标记(CD86、CD80、CD83、CD-1a、HLA-DR)。各中药组TNF-α、sTNF-αR的含量明显低于空白组。
结论:
复方中药对ANLL-CR患者CD34+来源DC具有诱导作用,在CD34+向DC转化过程中,复方中药对白血病细胞及DC细胞分泌TNF-α、sTNF-αR有抑制作用,对DC分化、成熟、功能产生有利的影响,提高其特征性标记的表达,增强其抗原提呈能力。