【摘 要】
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目的:探索麦粒灸法改善血脂异常情况下肝细胞自噬的分子作用机制。基于AMPK/mTOR信号通路,探索麦粒灸法通过影响TFEB,调节高脂血症SD大鼠肝脏细胞自噬的分子生物学机制。方法:本研究以SD大鼠（n=30）为研究对象,在喂养高脂饲料8周后采用ELISA法检测血脂四项（LDL、TC、TG、HDL）。实验分组:以Blank组、HFD组、HFD+Drug组、HFD+CC+Moxi组与麦粒灸干预组（HF
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目的:探索麦粒灸法改善血脂异常情况下肝细胞自噬的分子作用机制。基于AMPK/mTOR信号通路,探索麦粒灸法通过影响TFEB,调节高脂血症SD大鼠肝脏细胞自噬的分子生物学机制。方法:本研究以SD大鼠（n=30）为研究对象,在喂养高脂饲料8周后采用ELISA法检测血脂四项（LDL、TC、TG、HDL）。实验分组:以Blank组、HFD组、HFD+Drug组、HFD+CC+Moxi组与麦粒灸干预组（HFD+Moxi组）进行对照,每组6只。干预方式:Blank组喂养基础饲料,食水不限;HFD组喂养高脂饲料,食水不限;HFD+Drug组喂养高脂饲料,食水不限,阿托伐他汀灌胃;HFD+Moxi组喂养高脂饲料,食水不限,麦粒灸刺激双侧后三里（3壮/穴）;HFD+CC+Moxi组喂养高脂饲料,食水不限,腹腔注射Compound C溶液后进行“后三里”麦粒灸刺激（3壮/穴）。在干预频率与周期上,各干预措施频率保持一致,1次/天,每干预5天休息两天,共干预10周。检测项目:1、酶联免疫吸附试验检测SD大鼠血清HDL、LDL、TC、TG的水平;2、肝细胞油红O染色评估肝脏脂质沉积;3、免疫组化法检测肝脏组织TFEB的表达分布;4、免疫荧光法检测各组大鼠肝脏组织LC3、p62、TFEB表达分布;5、免疫印迹法检测肝脏组织LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62、AMPK、mTOR、TFEB表达量;6、实时定量聚合式酶联反应法检测大鼠肝脏组织AMPK、mTOR、TFEB的mRNA表达。结果:1、双侧“后三里”麦粒灸刺激能够增加高脂血症SD大鼠血清HDL的表达,降低血清LDL、TC、TG的表达;2、麦粒灸“后三里”能够减少肝脏切片中的脂肪积累,改善肝细胞的脂肪变性;3、麦粒灸刺激“后三里”能够增加高脂血症SD大鼠肝脏LC3阳性细胞核数量和蛋白表达、减少肝脏P62阳性细胞核数量及蛋白表达,显著增加肝脏的自噬水平;4、麦粒灸“后三里”刺激能够增加AMPK的蛋白及mRNA表达,抑制mTOR的蛋白及mRNA表达,增加TFEB的阳性细胞核数目、阳性细胞计数、蛋白及mRNA表达。结论:“后三里”麦粒灸能够改善高脂血症SD大鼠的血脂水平,并能够通过激活肝脏AMPK/mTOR信号通路增加TFEB的表达,并启动LC3等自噬基因的转录和溶酶体的合成,以提高大鼠肝细胞自噬水平,进而改善肝细胞的损伤和脂质代谢能力。
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