本论文是研究有关哺乳动物性别控制相关的问题。论文共分为两大部分：第一部分，包括第一章和第二章，为文献综述部分；第二部分，包括第三至第六章，为试验研究部分。 第三、四章研究的目的是确定流动细胞分离检索仪分离的精子对牛卵母细胞体外受精和胚胎发育的影响，以及确定精子分离过程及染色是否会引起胚胎染色体异常。共使用了4273个从牛卵巢抽取的卵母细胞并分别与3种类型的冷冻精子(分离、染色未分离和未染色未分离)进行体外受精(IVF)试验。这些精子分别来自于3头公牛，每头公牛重复试验3～5次。此外，还应用细胞遗传学方法对351个第6～8 d的IVF囊胚进行了染色体分析。数据使用ANOVA程序、方差分析或卡方检验等进行统计分析。结果显示，1)3种类型精子受精后的囊胚率未有显著差异，分别为20.4％，22.62％和22.14％，只是分离精子的卵裂率比未分离的精子要低(71.93％比53.66％；P＜0.05)。2)所测试的3头公牛的卵裂率和囊胚率在公牛之间有所差异，即H008号公牛的卵裂率明显低于H010和H016号公牛(分别为40.6％比74.4％和69.8％；p＜0.05)，囊胚率明显低于H010号公牛(17.4％比25.1％；p＜0.05)。3)分离精子、染色未分离精子和未染色未分离精子的胚胎中，染色体组成表现为异常的，即嵌合体的胚胎分别占57％(82／145)、59％(59／106)和65％(65／100)，三者染色体异常的比例无显著差异。4)胚胎染色体异常的频率在不同公牛之间存在差异，即H016号公牛与H008号公牛的胚胎染色体异常率差异显著(30％比45％；p＜0.05)。5)第6、第7d和第8d回收的囊胚染色体异常频率之间没有显著差异。结果证明：1)分离过程或染色并没有影响胚胎发育到囊胚，也没有影响胚胎的染色体组成，流动细胞分离检索仪分离的精子可以有效地用于牛胚胎的体外生产；2）胚胎的发育阶段对胚胎染色体的异常也没有影响． 第五章研究的目的是，比较由流动细胞分离检索仪分离的牛X和Y精子及未分离精子进行单精子胞质内注射（ICS ）和IVF后的胚胎发育状况及染色体组成情况，确定分离精子是否对ra结果有影响。用来自于同一头公牛叫）分离的 X和 Y及未分离的精子分别禾体外成熟的萝母细月进行IC＊和1＊F，结果显示，Z）3禾精子ICSI或IVF后的卵裂率和囊胚发育率没有显著差异（只是IVF组分离精子的卵裂率低于未分离精子，p＜0．05）； 2）同一种类型精子ICSI或＊ 后的卵裂率及囊胚率差异也不显著，分离精子ICSI的卵裂率禾囊胚率与其IVF 白结果相近，分别为71．75O比65O，22．1o比25．6o。爿 ICSI禾 IVF产生的第 7 d禾第 8 d囊胚进行《 渗、固定及染色等处理后，检查胚胎细胞数和染色体组成，其结果是，分离的X和 Y精子和未分离精子ICSI后囊胚的平均细胞数三者之间无差异 巾功．l），同样＊ 后的翼胚平均细胞数也无差异，但ICSI i的平土全胞数低 于 IVF组（p、0＊05）。染色体分析的结果表明，ICSI禾 IVFZtfl囊胚的染色体异常率，3种类型的精子之间不存在差异。ICSI和IVF两组的囊胚染色体异常率，二者之间也未有显著差异＊0．9％比33．6O）。总之，分离精子没有影响ICSI胚胎的发育，n 过程及分离精子也没有增加 ICSI胚胎染色体的异常率，流动细胞分离仪分离的牛精子可以有效的应用于ICSI。 第六章的研究是运用分子克隆技术，从小鼠的睾丸中分离和克隆一个新的基因，称为GSE（gonad－specific expression gene）。fR省酸序列分析揭示，GSE CDNA的开放阅读框架的长度为 745hp，编码由247个氨基酸残基组成的、预测分子量为 27石 Kda的蛋白质。从推断出的蛋白质氨基酸排列顺序表明，GSE蛋白质在细胞中可能是一个不带有信号肚的可溶性蛋白石 印迹只检测到有限数量的基因组DNA片断，提示GSE是一个单拷贝的基因u用放射性同位素标记了的小鼠 GSE CDNA为探针，与从各种成年小鼠组织中提取的 POly（A）’RNA（各 ZPg ） 进行Norther＊印迹分析显示，GSE mRNA在小鼠 卜体细胞组织卜心、肝、肾、肺、脑。骨骼肌、及脾）中没有检测到其表达，但在睾丸中有强转录表达，在卵巢中有低转录表达。为了阐明GS［5表达与配子发生的关系，从0。～49 日龄小鼠睾丸和卵巢中提取mRNA 每祥品 0．sllg）将其与特定的 GSE cDNA引物进行 RT－PCR反应，分析的结果发现，GSE；nRNA在出生后第 14天的小鼠睾丸中首先被检测到，这一时间正是中粗线期精母细胞很可能出现的时期。为了进一步调查GSE是否在限定的睾丸生殖细胞中特异表达，以小鼠 GSE CDNA反向转录的 RNA为探针与小鼠睾丸切片进行原位杂交的分析证实，GSE mRNA分布于精母细胞 z（粗线期人 圆形精细胞以及伸长精细胞的细胞质中，这一结果与 RT干C R分析的结果相吻合。从另一方面来看，GSE mRNA在出生时小鼠的卵巢中己经出现，这也正是生殖细胞进行减数分裂的时间。上述的这些结果提示，GSE与配子发生过程中的减数分裂有?