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目的:以宫颈癌乏氧Hela细胞为研究对象,通过与常氧Hela细胞对比,研究不同剂量的放射线及组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(trichostatin A,TSA)对不同状态下Hela细胞增殖的抑制作用,探讨了TSA作为一种放疗增敏剂对不同状态下Hela细胞放射敏感性的影响,并进一步研究了其放射增敏的分子机制,为宫颈癌的放射治疗提供新的方向。方法:1.体外通氮法创建肿瘤细胞乏氧模型;2.细胞抑制率分析:应用四甲基偶氮唑蓝(methylthiazolyl tetrazolium, MTT)快速比色法检测不同浓度TSA对常氧及乏氧状态下Hela细胞生长的影响;分别计算两种状态下的50%细胞致死浓度(the 50% inhibition concentration, IC50)和10%细胞致死浓度(the 10% inhibition concentration,IC10);3.细胞存活分数测定:应用MTT法检测IC10浓度的TSA对常氧Hela细胞不同照射方式后细胞存活分数的影响;利用克隆形成法测定IC10浓度的TSA对常氧及乏氧状态下Hela细胞细胞存活分数的影响;4.单击多靶模型拟合细胞存活曲线,计算放射增敏比(sensitive enhencement ratio,SER);5.采用免疫细胞化学法测定不同状态下TSA处理前后Hela细胞中乏氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible Factor-1 alpha, HIF-1α)和血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)蛋白的表达。结果:1.TSA可明显抑制常氧及乏氧状态下Hela细胞的生长,同时可以改变细胞的形态。随着TSA作用时间的延长和作用浓度的增大,抑制作用增强,呈现一定的时间-浓度依赖性。TSA对常氧Hela细胞的IC50和IC10分别为0.587μmol/L和0.031μmol/L;TSA对乏氧Hela细胞的IC50和IC10分别为0.947μmol/L和0.076μmol/L;2.放射前使用IC10浓度的TSA预处理,常氧Hela细胞获得了更好的放射敏感性,放射增敏比(sensitive enhencement ratio,SER)为1.69,IC10的TSA对2.0Gy/次、1.0Gy/次(×2)、0.5Gy/次(×4)分割放射组的SER分别为1.45、1.64、1.96。进一步研究发现,与单次放射相比,小剂量多次分割放射取得了更好的放射增敏效应;3.与常氧Hela细胞相比,乏氧Hela细胞对X射线的敏感性明显降低,IC10的TSA作用乏氧Hela细胞24h,可见放射增敏效应,SERD0、SERDq、SERSF2分别为1.48、1.80、1.34;4.常氧Hela细胞HIF-1α胞浆及胞膜均呈阴性(-)表达,VEGF胞浆阳性(+)表达;经乏氧处理后,HIF-1α胞浆及胞膜均呈强阳性(++)表达,VEGF胞浆也呈强阳性(++)表达;经乏氧联合IC10TSA处理后,HIF-1α胞浆及胞膜呈阴性表达,VEGF胞浆也呈阴性(-)表达。结论:TSA对常氧及乏氧状态下的Hela细胞均有放射增敏作用,其可作为一种放射增敏剂进行更深入的研究;TSA通过下调HIF-1α、VEGF蛋白的表达抑制乏氧细胞增殖,降低乏氧细胞对X射线的放射抵抗,提示HIF-1α/VEGF通路可能是TSA放射增敏作用的靶点之一。