【摘 要】
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小麦面粉的烘烤品质与高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)的组成密切相关。烘烤品质的常规测定方法通常需要昂贵的设备和较大的样品量。从20世纪80年代开始,免疫学方法逐渐应用于小麦
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小麦面粉的烘烤品质与高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)的组成密切相关。烘烤品质的常规测定方法通常需要昂贵的设备和较大的样品量。从20世纪80年代开始,免疫学方法逐渐应用于小麦品质的预测和筛选,其特点是操作简单、成本低、所需样品量少。单克隆抗体是由单个B淋巴细胞克隆受抗原刺激分泌的,具有性状均一、抗原特异性强等特点,麦谷蛋白单克隆抗体在小麦品质筛选和麦谷蛋白研究等方面具有良好的应用前景。HMW-GS 1Bx17+1By18是公认的对面粉烘烤品质影响较大的优质亚基,它们的特异性单克隆抗体在小麦品质研究领域具有重要应用价值。目前应用传统的基因克隆方法尚未能分离出1By18亚基基因,如果能制备该亚基的特异性单克隆抗体,就可用于筛选小麦cDNA表达文库,钓取1By18亚基的编码基因,并为贮藏蛋白基因克隆提供可供选择的简便方法。 本研究以面包小麦品种Kontrast种子为材料,在SDS-PAGE、RP-HPLC分离鉴定的基础上,用SDS-PAGE电泳法纯化回收1Bx17+1By18混合亚基,以这两种亚基的混合物为抗原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备单克隆抗体,并对制备的单克隆抗体作了初步的应用研究。 本研究共制备了9株营阳性单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为1E1F7C5F7D4、1E1F7C5FTE7、1E1F7C5F7F4、2C7G6D4G4E5、2C7G6D4G4F2、2C7G6D4G4H6、1E1F7C5FTB 11、1E1F7C5F7E4和1E1F7C5F7E2。 本研究还运用生物信息学方法对HMW-GS的抗原决定簇作了初步预测,为后续单克隆抗体的制备提供参考。
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