【摘 要】
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该研究在mRNA水平运用实时定量RT-PCR检测血液肿瘤细胞株、儿童急性白血病细胞及正常儿童骨髓细胞中PAX5 mRNA的表达水平;在蛋白质水平运用Western Blotting分析血液肿瘤细胞
【出 处】
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上海第二医科大学 上海交通大学医学院 上海交通大学
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该研究在mRNA水平运用实时定量RT-PCR检测血液肿瘤细胞株、儿童急性白血病细胞及正常儿童骨髓细胞中PAX5 mRNA的表达水平;在蛋白质水平运用Western Blotting分析血液肿瘤细胞中BSAP的表达水平,从中了解PAX5/BSAP在儿童急性白血病发生发展中的表达特性,为进一步明确其在急性白血病发生中的作用机制奠定基础,同时也为利用PAX5基因表达产物作为潜在肿瘤标志和基因治疗靶位的应用方面提供依据.该研究包括以下三部分:第一部分实时荧光定量RT-PCR检测血液肿瘤细胞株PAX5 mRNA表达该研究建立了实时定量RT-PCR方法,检测了6个血液肿瘤细胞株中PAX5与CD19的mRNA相对表达量.研究中把RNA反转录成的cDNA进行系列稀释(0.5-50ng/反应)作为实时PCR扩增模板,并用于制备PAX5、CD19和内源控制物GAPDH的相对标准曲线.第二部分Western Blotting分析血液肿瘤细胞BSAP表达水平为了观察血液肿瘤细胞中BSAP蛋白质表达水平,初步探讨其与PAX5 mRNA表达水平之间的关系.采用Western Blotting分析了6个血液肿瘤细胞株和4个临床样本(包括2例B-ALL,1例T-ALL和1例AML)中BSAP表达水平.第三部分PAX5 mRNA表达与儿童急性白血病的相关性研究为了进一步了解急性白血病中PAX5 mRNA的表达特性,初步分析探讨PAX5基因表达与各临床或实验室指标之间的关系,该研究运用实时定量RT-PCR测定了6例正常儿童、58例初发和4例复发急性白血病儿童(其中包括39例B-ALL,10例T-ALL和13例AML)骨髓细胞中PAX5 mRNA的表达水平.
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