该研究通过建立星形胶质细胞损伤模型,利用双向电泳技术获取星形胶质细胞损伤后差异表达蛋白,探求损伤后星形胶质细胞的一系列应答反应及蛋白水平上的动态变化.我们采用原代脊髓胶质细胞进行研究以模拟脊髓损伤时胶质细胞蛋白质组学的变化.新生的Wistar大鼠,分离脊髓,剥除脊膜,取出脊髓至解剖液,然后用煎刀煎碎,再用胰酶消化,轻轻吹打后吹散脊髓组织,差度离心法富集胶质细胞.然后进行全脊髓混合培养,混合培养至第12天后通过机械振摇、玻璃培养瓶反复贴壁及调整接种密度等方法去除其它细胞,得到较纯的星形胶质细胞.我们采用GFAP免疫荧光方法标记胶质细胞,通过记数,检查培养纯度.为了研究星形胶质细胞在脊髓损伤修复中的作用,需要建立能再现损伤和再生过程的实验模型.在进行IPG等民聚焦时,我们最终确定30,000Vhr作为控制一向的条件.在SDS-PAGE凝胶电泳时采用了优化后的凝及配制方法,同时在电泳时采用固定胶条位置的方法,提高了实验的重复性.在该研究的染色程序中,所有染色时间均控制在4分钟以内.在星形胶质细胞的双向电泳图谱中,70％以上的蛋白集中分布在MW30-69kDa的范围内;约有60左右的蛋白集中分布在pI3.0-6.4的范围内.同时也可看到脊髓星形胶质细胞在损伤后的不同时间其蛋白表达表现出了差异,其中在损伤后的图谱中有一定的相似性.该论文对大鼠脊髓星形胶质细胞纯化培养方法进行了改进,以使其能符合双向电泳研究的需要,并从形态学及免疫荧光两方面进行了验证.同时新设计了星形胶质细胞的机械损伤模型,使其无论在损伤程度还是在重复性方面得到了提高,在此基础上,利用双向电泳技术,获得了一些差异表达蛋白.并对这些在该模型中发生动态变化的差异蛋白采用胶内酶切和肽段提取,然后用MALDI-TOF/MS进行肽质量指纹谱(PMF)分析,其中有10个蛋白得到了鉴定,为进一步研究探讨脊髓损伤修复的分子机理提供线索.