原花青素对紫外线诱导晶状体上皮细胞氧化损伤保护作用的研究

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目的应用碱性单细胞凝胶电泳实验和流式细胞定量检测研究原花青素(Procyanidins, PC)对中波紫外线(Ultraviolet, UVB)诱导的人晶状体上皮细胞(lens epithelial cells, LECs)DNA氧化损伤的保护作用,为原花青素临床治疗白内障提供实验依据。方法将LECs传代培养取第4代细胞随机分为5组。未处理组:正常培养的LECs;阳性对照组:正常培养的LECs+UVB;实验组:PC组:LECs+PC+UVB;牛磺酸(Taurine, TAU)组:LECs+TAU+UVB;维生素C (Vitamin C, VC)组:LECs+VC+UVB。各抗氧化剂组按终浓度从低到高(0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml)再分为3个亚实验组。各实验组于UVB照射前2小时加药,常规培养。采用照射剂量为15mJ/cm2的UVB分别照射各实验组和对照组的LECs,继续完全培养1小时后收集细胞,分别用碱性单细胞凝胶电泳法计数分析不同处理组LECs DNA单链断裂的程度和流式细胞定量检测分析各组细胞的凋亡率。结果各PC组的尾长、尾部DNA%、尾力矩及LECs凋亡率与阳性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01),表明各浓度PC液培养后的LECs对UVB的损伤均有抵抗作用。各PC组的尾部DNA%、尾力矩与未处理组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。0.1mg/ml和0.2mg/ml的PC组LECs凋亡率与未处理组比较,差异均无统计学意义(P>0.05),表明该浓度PC对LECs的氧化损伤有较强的保护作用。各抗氧化剂组间尾长、尾部DNA%、尾力矩和LECs凋亡率相比差异均有统计学意义(P<0.01),且PC实验组的结果在数值上均明显小于牛磺酸和VC实验组,即PC具有相对牛磺酸和VC而言更强的抗氧化保护作用。在一定浓度范围内,各抗氧化剂组尾长、尾部DNA%、尾力矩和凋亡率随抗氧化剂浓度的增大逐渐降低。结论外源性PC对UVB照射诱导的人LECs DNA的氧化损伤有保护作用。PC的保护作用明显强于已研究证实的抗氧化剂TAU和VC,并且在一定浓度范围内随着浓度的增加其抗氧化作用逐渐增强。
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