磁性碳复合支架材料的制备及用于体外肿瘤性骨缺损的研究

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关于肿瘤性骨缺损的问题,提供一种兼具术后辅助治疗肿瘤和骨缺损修复的双功能生物材料的方案具有重要意义。石墨烯、碳纳米管等碳材料由于其极大的比表面积、良好的力学性能及骨诱导性在骨组织工程中具有应用潜力。但相比于传统骨修复材料,其生物相容性及骨诱导性仍然存在差距,因此通过改性或复合其他功能颗粒来改善碳支架材料的综合性能显得尤为重要。此外,磁场作为一种非入侵的外加物理刺激,已经证实能够对细胞行为产生一定的影响,药物递送方面能够控制磁性药物载体运动,富集在病灶区,来控制药物释放。基于这个思路,我们构建了一种微观三维层柱状碳支架结构,原位复合羟基磷灰石及四氧化三铁,赋予材料一定的生物相容性与磁性,考察其药物负载及释放能力,体外细胞实验评价材料的成骨活性与抗肿瘤效果。结论如下:1.考虑到石墨烯与碳纳米管在溶液中易发生团聚,分散性差,因此将二者通过静电自组装构建微观三维层柱状结构,提高了比表面积,为后续功能颗粒的填充提供空间。并将羟基磷灰石(HA)与四氧化三铁(Fe3O4)通过水热法原位复合在支架材料内部与表面,分别制备出三维碳支架材料RGO/CNT,在此基础上制备出一种具有良好生物相容性的RGO/CNT/HA支架材料以及兼具生活相容性与磁性的RGO/CNT/HA/Fe3O4支架材料,研究结果显示,180℃/3h水热条件下RGO的缺陷更小,说明升高温度减小反应时间有益于RGO的还原。三种复合支架材料均具有窄孔径分布的三维介孔结构,孔径均约为4.1nm,其中2相材料RGO/CNT具有更大的比表面积(216.29 m~2/g)及孔容(0.46 cm~3/g)。此外,相比于纯Fe3O4,RGO/CNT/HA/Fe3O4具有更小的矫顽力及剩余磁化强度,便于磁化与退磁。2.研究了不同支架材料在不同条件下的药物负载及释放能力,研究结果显示:无磁场刺激时,RGO/CNT由于其较大的比表面积而装载了更多药物,达到255.1μg/mg;添加磁场后,磁性材料RGO/CNT/HA/Fe3O4药物负载量显著提升,在130m T下载药量达到310.8μg/mg,这说明一定强度的磁场刺激有利于材料对药物的吸附。相比于无刺激,添加磁场后,载药体系释药速度下降,这说明磁场的添加可以有效缓解药物突释。引入聚己内酯(PCL)成膜后,可进一步缓释药物。3.为了评价复合材料在外加磁场刺激下的成骨活性,通过溶剂挥发法制备了PCL、PCL/RGO/CNT、PCL/RGO/CNT/HA、PCL/RGO/CNT/HA/Fe3O4四种复合支架薄膜材料,并施加0m T、20m T、60m T、130m T静磁场刺激,研究结果显示复合了HA与Fe3O4功能颗粒的PCL/RGO/CNT/HA/Fe3O4薄膜材料具有更好生活相容性,在一定程度上能够促进细胞增殖。施加磁场之后,这种优势得到扩大,说明磁性材料与磁场具有协同作用,这种作用可以促进细胞增殖。RT-q PCR实验结果表明,磁性薄膜材料PCL/RGO/CNT/HA/Fe3O4联合60m T静磁场能够促进多个成骨相关基因((ALP、COL-1、Runx2、OPN、ROX、BMP-2))表达,有利于干细胞成骨分化。4.为了考察载药体系在外加磁场下的抗肿瘤效果,以磁性PCL/RGO/CNT/HA/Fe3O4薄膜材料作为药物载体负载模型药物盐酸小檗胺(BBM),并施加0m T、20m T、60m T、130m T静磁场刺激,研究结果显示相比于南朝向,磁场北朝向有利于抑制肿瘤细胞增殖。单一磁场刺激,130m T抑制肿瘤细胞效果最佳。同一磁场条件下,处理48h后,BBM@PCL/RGO/CNT/HA/Fe3O4组细胞存活率最低,约为39%,这说明磁场、磁性薄膜材料、药物三重作用强化了对肿瘤细胞的抑制。RT-q PCR实验结果表明载药体系在静磁场作用下能够通过抑制Bcl-2的表达来促进细胞凋亡。
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