雷公藤甲素和雷公藤红素在蜂蜜中的含量测定及其降解特征研究

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近年来,蜂蜜因其具有丰富的营养价值及药用价值越来越受到人们的喜爱,我国的蜂蜜产量、出口量也位居世界前列,质量检测也处在较高水平,但同时蜂蜜安全也存在一些问题,蜂蜜中毒事件在我国屡见不鲜,曾在湖北、云南、广东、福建等地出现蜂蜜中毒事件,造成中毒的原因较多,其中大多数与有毒蜜源植物有关,代表植物为雷公藤。而目前对于蜂蜜中有毒物质的检测较为匮乏,本文建立了一种将磁性纳米粒子与QuEChERS技术结合,通过液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)快速测定蜂蜜中雷公藤甲素和雷公藤红素含量的方法,同时,对于蜂蜜中的雷公藤甲素及雷公藤红素的降解特征进行研究。主要研究内容结果如下:1.本研究以蜂蜜为主要研究材料,对传统的QuEChERS前处理方法进行优化。利用乙腈提取液对样品进行提取,加入氯化钠和无水硫酸镁盐析,之后实施离心操作,对于最后的提取液,再加入PSA、C18粉末、MNPs进行净化,并对雷公藤甲素和雷公藤红素的液相色谱—串联质谱(LC-MS/MS)仪器分析条件进行优化并上机检测。对建立的方法进行方法学验证,实验结果表明线性范围在0.05-100μg/kg之间,线性相关系数R~2大于0.999,具有良好的线性关系。雷公藤甲素检出限(LOD)为0.1μg/kg,以及雷公藤红素的方法检出限(LOD)为0.01μg/kg,定量限(LOQ)分别为0.33μg/kg和0.033μg/kg。利用建立的方法对蜂蜜基质进行添加回收率实验,雷公藤甲素和雷公藤红素在10μg/kg、50μg/kg、100μg/kg三个添加水平的回收率范围在82.62%~93.3%,相对标准偏差RSD<7.69%,精密度良好(日间精密度和日内精密度均低于9.16%),准确度较高,可用于定量定性分析蜂蜜中的雷公藤甲素和雷公藤红素含量。结合本文建立的检测方法,对毒源植物分布较广及其邻近地区的蜂蜜进行了实际样品的检测,雷公藤甲素和雷公藤红素的最终检出率分别5%和2.5%,检出含量符合标准。2.分别研究了雷公藤甲素和雷公藤红素以及在蜂蜜在不同条件的贮藏及水冲泡条件下的降解特征。实验结果表明,雷公藤甲素和雷公藤红素标准溶液的降解与温度有着密切的关系,其降解速度会随温度的升高而加快。蜂蜜在4℃条件下贮藏6个月后,雷公藤甲素和雷公藤红素的浓度没有发生明显的变化;在常温20℃贮藏条件下放置6个月后,雷公藤甲素的浓度约下降了10%,雷公藤红素的浓度约下降了15%;在模拟蜂巢温度35℃条件下放置6个月后,雷公藤甲素的浓度约下降了50%,雷公藤红素的浓度约下降了60%。实验对比了三种不同条件下的水对蜂蜜进行冲泡后雷公藤甲素和雷公藤红素的浓度变化,实验结果表明在60℃的长时间恒温条件下浓度会有明显下降,但在常温储存及热水冲泡短时间维持的条件下降解幅度不大。由此可知,在6个月内,蜂蜜中雷公藤甲素和雷公藤红素不能随着时间的推移自行完全降解,且采用不同的水冲泡条件也不能使其完全降解。
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