【摘 要】
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目的:JAK2V617F突变是骨髓增殖性肿瘤（MPN）的主要驱动基因突变之一,二代测序（NGS）检测到骨髓增殖性肿瘤中存在非驱动基因突变,本课题组前期对23例三阴性骨髓增殖性肿瘤患者进行二代测序体细胞突变,发现MTHFR和NQO1基因发生高频单核苷酸变异:NQO1 C559T,MTHFR C665T,是否与MPN的发生发展相关,目前仍不清楚。本研究旨研究MTHFR和NQO1基因突变在骨髓增殖性肿瘤
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目的:JAK2V617F突变是骨髓增殖性肿瘤（MPN）的主要驱动基因突变之一,二代测序（NGS）检测到骨髓增殖性肿瘤中存在非驱动基因突变,本课题组前期对23例三阴性骨髓增殖性肿瘤患者进行二代测序体细胞突变,发现MTHFR和NQO1基因发生高频单核苷酸变异:NQO1 C559T,MTHFR C665T,是否与MPN的发生发展相关,目前仍不清楚。本研究旨研究MTHFR和NQO1基因突变在骨髓增殖性肿瘤的作用及对JAK2V617F阳性HEL细胞增殖、凋亡和周期、酶活性的影响。方法:1、用慢病毒感染技术在HEL细胞株上分别过表达野生型MTHFR基因和突变型MTHFR基因及野生型NQO1基因和突变型NQO1基因,分成HEL/N C组、HEL/WT-MTHFR组和HEL/MUT-MTHFR组及HEL/NC组、HEL/WTNQO1组和HEL/MUT-NQO1组;2、应用CCK-8法检测过表达野生型和突变型MTHFR和野生型和突变型NQO1对HEL细胞的增殖变化;3、应用流式细胞术检测过表达野生型和突变型MTHFR和野生型和突变型NQO1对HEL细胞的凋亡和周期;4、应用ELISA法分别检测过表达野生型和突变型MTHFR和野生型和突变型NQO1对HEL细胞中的MTHFR酶活性、NQO1酶活性;5、RT-PCR检测过表达野生型和突变型MTHFR和野生型和突变型NQO1对HEL细胞JAK2表达的影响。结果:1、同对照组对比,HEL/WT-MTHFR组促进HEL细胞增殖,HEL/MUT-MTHFR组抑制HEL细胞增殖,差异有统计学意义（P<0.05）;同对照组对比,HEL/WT-NQO1组抑制HEL细胞增殖,HEL/MUT-NQO1组促进HEL细胞增殖,差异有统计学意义（P<0.05）。2、同对照组对比,HEL/MUT-MTHFR组促进HEL细胞凋亡,差异有统计学意义（P<0.05）,HEL/WT-MTHFR组没有促进HEL细胞凋亡,差异无统计学意义（P>0.05）;同对照组对比,HEL/WT-NQO1组和HEL/MUT-MTHFR组都没有促进HEL细胞凋亡。3、同对照组对比,HEL/WT-MTHFR组和HEL/MUT-MTHFR组的HEL细胞中的MTHFR酶活性升高;同对照组对比,HEL/WT-NQO1组的HEL细胞中的NQO1酶活性无明显变化,HEL/MUT-NQO1组的HEL细胞中NQO1酶活性下降,差异有统计学意义（P<0.05）。4、同对照组对比,HEL/WT-MTHFR组和HEL/MUT-MTHFR组的HEL细胞中的JAK2表达无明显差异;同对照组对比,HEL/WT-NQO1组和HEL/MUT-NQO1组的JAK2表达无明显差异。结论:1.同对照组细胞相比,HEL/MUT-MTHFR组可以抑制HEL细胞增殖,MTHFR酶活性上升;同对照组细胞相比,HEL/WT-MTHFR组可以促进HEL细胞增殖。2.同对照组细胞相比,HEL/MUT-NQO1组可以促进HEL细胞增殖,NQO1酶活性下降;同对照组细胞相比,HEL/WT-NQO1组可以抑制HEL细胞增殖。
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