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实验背景:牙周病是一种常见的炎症性疾病,常常导致不可逆的牙槽骨吸收和随后的牙齿脱落。研究表明,破骨细胞被认为是体内唯一负责骨吸收的细胞,靴向抑制破骨细胞活化被认为是逆转骨破坏最有效的治疗策略。NF-κB活化因子配体(RANKL)已被确定为骨吸收的主要介质。因此,抑制RANKL信号传导的药剂具有抑制骨吸收或破骨细胞生成的潜力。实验目的:本研究旨在确定JNK抑制剂JNK-IN-IX对LPS诱导大鼠牙周炎模型中骨吸收的抑制作用,以及在体外细胞实验中验证这一结果,并进一步研究JNK-IN-IX影响破骨细胞的增殖分化的机制。实验方法:通过MTT法测定JNK-IN-IX对骨髓间充质干细胞的细胞毒性;用M-CSF(30 ng/ml),RANKL(50ng/ml)以及不同浓度的抑制剂(0,12.5,25或50nM)来刺激骨髓间充质干细胞,然后进行TRAP(抗酒石酸酸性磷酸酶)染色,用Image J软件计算破骨细胞的数量和面积;将BMM种植在骨片上,并通过SEM检测抑制剂对破骨细胞骨吸收作用的影响;通过q-pcr检测成熟破骨细胞特异性基因的表达水平,以及Western-blotting检测不同时间段JNK-IN-IX对相关蛋白表达的影响,来分析JNK-IN-IX抑制破骨细胞诱导分化的机制。通过建立LPS诱导大鼠牙周炎模型并分析上颌骨Micro-CT,来确定JNK-IN-IX对大鼠牙槽骨吸收有抑制作用。实验结果:1.JNK-IN-IX在浓度≥128.8μM时对BMMs具有细胞毒性作用2.通过TRAP染色,我们发现JNK-IN-IX对破骨细胞的诱导分化有显著抑制作用,并在12.5～50nM随浓度升高抑制作用增强。3.破骨细胞标记基因如TRAP,降钙素受体CTR,Atp6v0d2以及组织蛋白酶K(CTSK)的表达也被JNK-IN-IX减弱,尤其是50nM浓度。4.通过计算骨陷凹面积发现JNK-IN-IX具有体外抑制破骨细胞骨的吸收作用。5.JNK-IN-IX通过抑制JNK磷酸化及其下游c-Jun来抑制RANKL诱导的破骨细胞作用,同时我们发现同期JNK-IN-IX刺激后骨保护素OPG表达显著升高。6.成功构建LPS诱导的大鼠牙周炎模型,Micro-CT示药物组抑制大鼠牙周炎的牙槽骨吸收,且高浓度组要比低浓度组作用明显。实验结论:1.JNK-IN-IX在体内以剂量和时间依赖的方式抑制骨髓间充质干细胞向破骨细胞的分化。2.JNK-IN-IX通过JNK-RANKL-OPG通路抑制破骨细胞作用。3.JNK-IN-IX在体外对大鼠牙周炎引起的牙槽骨吸收有治疗作用。