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目的克隆hBCRP基因并构建稳定表达该DNA分子的重组质粒，用重组质粒转染MDCKII-hMDR1细胞构建稳定共表达基因hBCRP和hMDR1的MDCKII-hMDR1/hBCRP细胞株，并进一步对其生物学功能进行研究。方法先采用Trizol试剂一步法从MDCKII-hBCRP细胞中抽提总RNA，接着采用RT-PCR方法合成cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增hBCRP基因。将hBCRP基因插入到哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1/Hygro中，脂质体法转染MDCKII-hMDR1细胞；潮霉素B（Hygromycin B）加压筛选阳性克隆，用RT-PCR方法分析阳性克隆中hBCRP在mRNA的表达。采用Transwell系统对共表达MDCKII-hMDR1/hBCRP细胞株的P-gp和BCRP转运体生物学功能进行评估。运用LC-MS/MS液质联用方法定量分析MDCKII-hMDR1/hBCRP细胞的生物学功能评估实验的特异性底物浓度。具体条件如下：采用岛津高效液相色谱系统（UFLC）和Agela Venusil C18色谱柱（2.1mm×50mm，5μm）进行化合物的分离。采用流动相A相：水：乙腈：甲酸（95：5：0.1，v/v），B相：水：乙腈：甲酸（5：95：0.1，v/v）对化合物进行线性梯度洗脱；运用AB API4000三重四级杆质谱仪配备ESI源，以多反应监测模式（MRM）进行离子检测，离子对分别为：拉贝洛尔m/z329.4→m/z162.5，单曲宁m/z313.0→m/z270.1，伊马替尼m/z494.5→m/z394.2，索拉菲尼m/z465.1→m/z270.1及其相对应的内标化合物：地西泮m/z285.0→m/z193.2，倍他米松m/z391.3→m/z361.4，达沙替尼m/z488.3→m/z232.3，SN-38m/z393.3→m/z349.3。结果成功构建了表达hBCRP基因的真核表达载体pcDNA3.1/Hygro/hBCRP，转染该质粒后获得了稳定表达人BCRP基因的MDCKII-hMDR1/hBCRP共表达细胞株，经过功能实验验证了MDCKII-hMDR1/hBCRP细胞株均可稳定的表达hMDR1和hBCRP基因。结论本研究中成功构建了稳定共表达hMDR1和hBCRP基因的MDCKII-hMDR1/hBCRP细胞株，其可作为一种有价值的体外模型应用于体外高通量筛选外排转运蛋白P-gp和BCRP介导的化合物跨膜转运及外排转运机制，还可用于研究BBB中外排转运蛋白P-gp和BCRP之间的相互作用。