【摘 要】
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目的:探讨algR基因在铜绿假单胞菌生物被膜播种型扩散中的作用及机制。方法:采用同源重组的方法敲除PAO1和PA17染色体中的algR基因,得到PAO1和PA17的algR基因敲除的同源重组菌P
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目的:探讨algR基因在铜绿假单胞菌生物被膜播种型扩散中的作用及机制。方法:采用同源重组的方法敲除PAO1和PA17染色体中的algR基因,得到PAO1和PA17的algR基因敲除的同源重组菌PSL317和PA17’;分别在PSL317和PA17’中通过电转染转入质粒pVDtacPIL(含有鞭毛和Ⅳ型菌毛基因)、pVDZ’2R(含有algR基因)和pEX1.8-rhlAB(含有rh1AB基因及rhlA启动子)。使用改良平板培养法建立PA17、PAO1、PSL317、PA17、PAOmucA56及各同源重组菌株的生物膜体外模型,观察各个菌株间生物被膜生长和播种型扩散的异同;RT-PCR检测各菌株algR基因在生物被膜生长过程中不同时间点(1,3,5,7,9,12天)的表达量;RT-PCR检测PAO1和PAOmucA56在生物被膜生长过程中不同时间点(1,3,5,7,9,12天)QS系统rhlA/B基因的表达量;在琼脂平板上观察PA17、PAO1、PSL317、PA17’及各同源重组菌株的游泳、群游、颤搐运动能力的差别。结果:PAO1于第12天发生播种型扩散,PA17于第7天发生播种型扩散;PA17的algR基因在第7天时最高,PAO1则在第11天时最高;PAO1的swimming、swarming以及twitching能力均强于PA17。PSL317相关实验菌株较PA17’相关实验菌株播种型扩散时间晚、运动能力强。PAOmucA56于第7天发生播种型扩散;PAOmucA56的algR基因在第7天时最高,PAO1则在第11天时最高;PAO1的rhlA在第11天表达最高,PAOmucA56的rhlA在第3天表达最高;PAO1的rhlB在第11天表达最高,PAOmucA56的rhlB在第9天表达最高。结论:证实了algR基因的高表达可促进铜绿假单胞菌的生物膜播种型扩散;algR基因影响生物被膜形成的基因调节通路中,rhlA/B通路可能有较大意义。
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