“靳三针”头穴对宫内窘迫大鼠大脑皮质GLU及GABA含量的影响

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新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)是因围产期胎儿脑部缺氧缺血(hypoxic-ischemic,HI)而导致新生儿缺氧缺血性脑损伤(HIBD),是导致新生儿神经系统功能障碍的重要原因。围产期胎儿脑部的缺氧缺血可发生于产前、产时、产后,其导致的以脑性瘫痪、癫痫为主的儿童脑病给新生儿的成长带来了极为严重的影响,同时也增加了患儿家庭和社会的各种压力。随着医学科学的不断进步,产妇保健、围产期保健水平的提高,早产儿和低体重产儿的存活率明显提高,但早产儿和低体重产儿的致残率也明显提高,因此,需要尽快建立一个确切有效的新生儿缺氧缺血性脑损伤的治疗方法,但如何治疗新生儿缺氧缺血性脑病迄今为止仍然是一个世界性的医学难题。针灸治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤作为一个简便、有效的治疗方法在近二十几年来获得了很大的发展,特别是在治疗脑性瘫痪、癫痫方面取得了极大的突破,随着越来越多针灸人对新生儿缺氧缺血性脑损伤的治疗和研究,部分临床工作者发现针灸治疗儿童脑病的疗效与患儿接受针灸治疗的年龄有着密切的联系,越早接受针灸治疗,效果越显著,因此研究针灸在新生儿时期对HIE的治疗作用有着重要意义,所以产生了在新生儿时期对HIE的患儿进行针灸治疗的想法。针灸治疗HIE有着简便、有效、无毒副作用等优点,能过在整体观念的基础上对HIE的患儿进行辩证施治,起到整体调节的作用。但由于目前我国医学系统中针灸治疗HIE的作用机制实验研究还极其缺乏,同时由于HIE的危险性和严重性,决定了针灸治疗HIE必须再明确作用机制的前提下建立一套安全有效的治疗方法。因此,先在动物实验上研究针灸治疗HIE的作用机制,对针灸在治疗HIE领域推广有着极为深远的意义。现代针灸在传统针灸的基础上加以总结和创新,在我国的岭南地区,形成了以“靳三针”为代表的针灸新流派,靳三针团队近二十年来一直致力与儿童脑病的研究,开展了多项临床研究,取得了丰硕的成果,但仍缺少对针灸治疗HIE作用机制的研究。本文在研究古代、现代文献的基础上,以“靳三针”头穴、针刺介入时间这两方面为切入点,探索针刺、针刺介入时间对宫内窘迫大鼠大脑皮质氨基酸途径的影响。目的:建立宫内窘迫导致HIE的大鼠模型,观察、检测正常组、模型组、针刺干预组大鼠的体重、行为学、大脑皮质氨基酸(GLU、GABA)表达的变化,探索“靳三针”头穴在不同的介入时间对HIE新生大鼠颅脑微环境的影响,为针灸治疗HIE提供确切的实验依据,为临床上针灸治疗HIE提供必要的理论支撑。实验方法:实验一:通过钳夹孕鼠双侧子宫动脉,延迟5min剖宫产术模拟缺氧缺血性脑损伤,建立HIBD大鼠模型。设立正常组、假手术组,正常组为正常孕鼠分娩的新生大鼠,假手术组为不做子宫动脉钳夹而行剖宫产的新生大鼠。观察正常组、假手术组和模型组新生大鼠出生后不同时间的体重、行为学改变及脑组织HE染色变化。实验二:将实验一各组新生大鼠按照随机分配原则将新生大鼠分为正常组、假手术组、模型组、针刺1组、针刺2组。模型组不针刺,针刺1组从第14天开始针刺,针刺2组从28天开始针刺。针刺1组根据随机分配原则分为三组:21天处死组(E21),28天处死组(E28),35天处死组(E35);针刺2组根据随机分配原则分为三组:35天处死组(E35),42天处死组(E42),49天处死组(E49)。在各组打到观察时间点时对大鼠经进行旷场中央格行为学评估后,处死,取脑组织,采用高效液相色谱法检测大鼠大脑皮质中Glu、GABA的含量。实验结果:一:成功探索建立宫内窘迫导致HIBD大鼠的造模方法。为研究新生儿HIE提供了确切的实验造模方法,方便后续科研的开展。二:针刺对脑组织Glu含量的影响:针刺对线粒体细胞凋亡通路的指标Glu有减少其含量作用,使细胞内Glu的含量生成减少,对细胞起到保护作用。三:针刺对脑组织GABA含量的影响:针刺对线粒体细胞凋亡通路的指标GABA有影响,但其各组间的差异不明显。实验结论:针刺“靳三针”头穴配合辩证选穴,在保证治疗时间的前提下能较大程度的改善缺氧缺血性脑损伤的预后,作用机制可能是通过线粒体细胞凋亡通路,减少Glu的含量,起到保护神经细胞的功能。
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