类肝素抑制血栓形成作用研究

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第一部分:类肝素理化性质及生物活性研究;一、类肝素理化性质及抗凝活性的研究;该论文研究了从猪十二指肠提取分离所得的类肝素样品的理化性质,包括其葡萄糖醛酸含量、氨基葡萄糖含量、总硫酸基含量、蛋白质含量及其抗Xa因子活性、APTT活性、聚丙烯酰胺凝胶电泳迁移性质.类肝素的葡萄糖醛酸含量为19.855g/100g干重,氨基葡萄糖含量为22.985g/100g干重,总硫酸基含量为18.980g/100g干重,蛋白质含量为5.263g/100g干重,抗Xa因子活性为70.4U/mg,APTT活性为33.8U/mg,FXa/FⅡa为2.1.其聚丙烯酰胺凝胶电泳迁移图谱与Sulodexide标准品比较,迁移性质十分接近.二、类肝素促进血浆LPL和HL释放作用的研究;该文采用比色测定法,研究了类肝素对大鼠脂蛋白脂酶(LPL)及肝脂酶(HL)的影响.第二部分:类肝素对体内、外血栓形成及血小板聚集的抑制作用;一、类肝素对体内、外血栓形成的抑制作用;采用Chandler法,研究类肝素对体外血栓形成的抑制作用,考察类肝素体外血栓的湿重、干重的影响.采用多种体内、半体内血栓形成法,研究类肝素对体内血栓形成的抑制作用.采用大鼠动静脉旁路血栓形成法,考察类肝素对形成血栓的湿重、干重的影响.采用大鼠颈动脉电刺激血栓形成法,考察类肝素对血管阻塞时间(OT)的影响.采用小鼠静注胶原—肾上腺素诱导血栓型偏瘫法,考察类肝素对小鼠15min内恢复情况的影响.取血测定全血凝血时间(CT),制备血浆,测定复钙时间(RT)、血浆凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)及优球蛋白溶解时间(ELT),比较各组差异.二、类肝素对体内、外血小板聚集的抑制作用;采用Born比浊法,研究类肝素体外抑制血小板聚集作用.结果表明,类肝素在体外对ADP、凝血酶诱导的血小板聚集有显著的抑制作用,对最大聚集时间有显著延长作用;而对于胶原诱导的血小板聚集也有显著抑制作用,但与前两种诱导剂诱导的聚集相比作用相对较弱,对最大聚集时间无显著延长作用.采用Born比浊法,研究类肝素体内抑制血小板聚集作用.实验结果表明,类肝素高剂量在体内对ADP、凝血酶诱导的血小板聚集有显著的抑制作用,但与同等剂量的sulodexide相比,作用相差较大;对最大聚集时间无显著延长作用.第三部分:类肝素对H<,2>O<,2>引起内皮细胞氧化损伤的抑制作用研究;采用H<,2>O<,2>损伤牛主动脉内皮细胞(BAEC)模型,通过测定细胞上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性、一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性,考察类肝素对H<,2>O<,2>(200μmol/L)损伤BAEC的抑制作用.
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