【摘 要】
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背景和目的:宫颈癌嗜神经侵犯（perineural invasion,PNI）影响患者手术方式（行保留神经的广泛子宫切除术,NSRH）的选择,其难点在于目前尚无相应的预测PNI的分子标记物。本研究拟探讨早期宫颈癌PNI的发生机制及其相关的分子标记物。内容与方法:1)首先回顾性分析宫颈癌患者PNI发生率与患者的临床病理参数和辅助治疗方式选择的相关性。然后建立大鼠背根神经节（dorsal root g
【基金项目】
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国家自然科学基金（81172477,81402135）； 上海市临床重点专科-“展两翼”（shslczdzk06302）；
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背景和目的:宫颈癌嗜神经侵犯（perineural invasion,PNI）影响患者手术方式（行保留神经的广泛子宫切除术,NSRH）的选择,其难点在于目前尚无相应的预测PNI的分子标记物。本研究拟探讨早期宫颈癌PNI的发生机制及其相关的分子标记物。内容与方法:1)首先回顾性分析宫颈癌患者PNI发生率与患者的临床病理参数和辅助治疗方式选择的相关性。然后建立大鼠背根神经节（dorsal root ganglion,DRG）与宫颈癌细胞共培养模型,筛选能够发生PNI的宫颈癌细胞系,明确肿瘤和神经间的相互作用,结合免疫荧光和激光共聚焦扫描技术确定肿瘤细胞对神经突起生长的促进作用;利用Transwell和活细胞荧光染料Di I标记技术观察神经对宫颈癌细胞迁移和侵袭的影响。2)通过活细胞观察技术明确PNI过程中施万细胞向肿瘤的迁移,结合基因集富集分析（Gene Set Enrichment Analysis,GSEA）和抗体芯片技术筛选PNI过程中高表达的关键分子CCL2并进行验证。利用流式细胞术和Transwell分析CCL2/CCR2在施万细胞促宫颈癌细胞转移中发挥的作用。利用鬼笔环肽标记和坐骨神经浸润模型等技术研究CCL2/CCR2对肿瘤EMT的影响。利用Western blot/ELISA/IF技术明确肿瘤细胞对施万细胞分泌基质金属蛋白酶的影响。利用ELISA/IHC/TCGA数据分析明确宫颈癌患者血清及组织中CCL2/CCR2的表达情况。3)RNA测序筛选与DRG共培养后的肿瘤细胞中表达明显增加的分子NMB并利用IHC检测其在PNI部位的表达情况。利用IF/Transwell技术检测NMB对神经突起和施万细胞运动的影响。结果:1.宫颈癌PNI的发生率为14.5%;宫颈癌PNI与肿瘤分期（FIGO2018）/肿瘤最大直径（2cm）/淋巴结转移/淋巴脉管侵犯/间质浸润/宫旁转移相关;PNI患者选择辅助治疗的比例增加。2.宫颈癌PNI具有选择性,体外共培养可观察到HeLa与Me-180细胞的PNI现象。宫颈癌细胞与DRG存在相互作用,肿瘤细胞促进神经突起生长和施万细胞向其移动,DRG诱导肿瘤细胞形态向梭形转变,并促进其迁移和侵袭。3.施万细胞源性CCL2通过结合肿瘤细胞表面CCR2介导宫颈癌细胞的增殖,迁移和侵袭,在HeLa和ME-180中影响不同的EMT相关因子。CCL2在宫颈癌尤其是腺癌患者的血清高表达;CCR2在PNI位点高表达;CCR2与宫颈癌患者的预后成负相关。此外,宫颈癌细胞可促进施万细胞MMP2/9/12的表达,而共培养后的肿瘤细胞MMP2/9/12表达量相较于对照组无差异。4.肿瘤细胞表达NMB;肿瘤细胞源性NMB促进神经突起的生长和施万细胞的迁移,驱动宫颈癌PNI的发生。结论:PNI可作为宫颈癌患者高危因素之一;宫颈癌细胞释放NMB,后者促进施万细胞向肿瘤细胞移动和神经突起的生长,驱动宫颈癌PNI的发生。施万细胞分泌CCL2刺激肿瘤细胞发生EMT,进而向神经移动。同时,宫颈癌细胞促进神经细胞表达MMPs,降解细胞外基质,为肿瘤细胞的转移提供合适的微环境。
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