研究背景与研究目的:目前冠心病、高血压等慢性血管性疾病发病率逐年增加,防治工作极为重要。内皮细胞功能紊乱是血管性疾病发生、发展的重要病理基础。血管内脂质代谢失调及缺氧等多种原因导致内皮细胞的损伤,血液与血管之间的屏障作用减弱,造成血小板黏附聚集,血管痉挛,血栓形成,血管腔狭窄。因此,保护及维持血管内皮细胞的正常功能,促进受损内皮细胞的增殖及提高细胞存活率是目前慢性损伤性血管疾病的研究热点。微小RNA(mircoRNA)是一种典型的多功能非编码RNA,能在转录水平降解或者抑制靶标mRNA的表达,调控细胞的生物功能,与细胞生成,炎症及肿瘤发展等多种病理生理相关。自噬是细胞内一种保护性程序,能够消化降解细胞内损伤的细胞器来维持细胞内环境稳态。微小RNA通过自噬对动脉粥样硬化的发生与进展的研究已有报道,而其中miR-155在损伤内皮细胞的作用研究甚少。本课题拟讨论miR-155对氧化应激条件下受损内皮细胞功能的影响,并探讨其可能调控机制。方法:1、在SicenceCELL细胞库中购买人脐静脉内皮细胞株(HUVECs),双氧水(H2O2)处理细胞后构建氧化应激细胞模型,通过检测细胞内毒性物质氧自由基的生成量及自噬程度等指标对细胞模型进行鉴定;2、在成功复制体外氧化应激细胞模型上,利用质粒转染miR-155,监测转染后细胞毒性物质的生成量及细胞增殖存活率的影响。同时采用RT-PCR和Western blotting、共聚焦免疫荧光技术检测损伤后细胞内的自噬发生的程度;3、探索ATG5在miR-155调控功能紊乱的内皮细胞的作用。结果:1、通过对不同浓度时间的H2O2摸索,在400nmol/l浓度12小时处理的内皮细胞氧自由基生成量趋于平稳,而自噬水平最高。利用此浓度及时间点复制体外氧化应激细胞模型。2、抑制miR-155表达后损伤的内皮细胞内自噬程度增高,细胞内活性氧ROS生成减少,细胞存活率增加。3、miR-155通过调控ATG5的表达来调节内皮细胞自噬水平来影响内皮细胞的功能。结论:miR-155通过自噬减少细胞毒性物质ROS的生成,提高氧化应激条件下受损内皮细胞的存活率;其中,自噬的调控作用可能是通过ATG5通路来实现。