目的:药物成瘾是一种慢性复发性脑病,与药物心理依赖相关的记忆牢固且持久,这种记忆很难随时间的延长而减弱,导致居高不下的复吸率。边缘系统参与药物成瘾的过程,PKMζ与记忆、长时程增强密切相关,我们推测海马和杏仁核的PKMζ可能参与吗啡成瘾记忆的过程,PKMζ特异性抑制剂ZIP脑区微注射可能擦除成瘾记忆,促进成瘾的消退,降低复吸率。为验证此假说,本课题应用条件位置性偏爱建立吗啡成瘾、消退和重建模型,通过行为学方法、分子生物学方法来研究大鼠成瘾过程中PKMζ和p-PKMζ表达量的变化,并在脑区局部微注射PKMζ特异性抑制剂ZIP,观察其是否影响成瘾大鼠的消退过程和CPP的重建,并检测成瘾大鼠脑区乙酰化组蛋白H3表达量的变化。通过此实验可以丰富成瘾复吸的机制,为开发阿片类物质成瘾的治疗提供新靶点。方法:1.选取体重在200g-300g之间的SD大鼠,实验环境适应两天,应用条件位置性偏爱建立吗啡成瘾模型,断头取脑,剥离出海马和杏仁核。Western blot检测模型组与对照组大鼠海马、杏仁核PKMζ和p-PKMζ表达量的变化。2.在海马和杏仁核进行脑立体定位插管术,待5-7天术后恢复,应用条件位置性偏爱建立吗啡成瘾模型,模型建立成功后第二天双侧脑区微量注射ZIP,注射后3小时测定偏爱分值,之后持续测定偏爱分值,当偏爱分值与前测试比较没有统计学差异与后测试比较有统计学差异,且持续三天以上,即说明大鼠进入成瘾消退组。3.待ZIP组和溶媒组大鼠成瘾均消退后,通过半剂量腹腔注射吗啡的方法点燃,观察是否重现对伴药侧的偏爱,探讨ZIP对复吸的影响。4.应用条件性位置性偏爱建立吗啡成瘾模型,Western blot检测模型组鼠与对照组鼠海马乙酰化组蛋白H3表达量的变化。结果:1.海马及杏仁核内PKMζ和p-PKMζ表达量均显著增加。2.海马和杏仁核局部微量注射ZIP促进成瘾记忆的消退,且作用持久。3.海马和杏仁核局部微量注射ZIP,阻止CPP重现,抑制成瘾大鼠的复吸。4.Western blot检测发现吗啡成瘾大鼠海马乙酰化组蛋白H3表达明显增加。结论:PKMζ参与成瘾记忆的过程,海马和杏仁核局部微注射PKMζ特异性抑制剂ZIP可以促进成瘾的消退,擦除成瘾记忆,抑制成瘾大鼠消退后复吸。