玫瑰红景天中络塞维的纯化及抗疲劳特性研究

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络塞维(rosavin)是玫瑰红景天中重要活性成分,本文研究了络塞维的分离纯化工艺,并且对其抗疲劳特性进行了初步研究,从而为络塞维在医药和功能食品等领域中的开发应用提供科学依据。首先,利用大孔树脂法对络塞维进行纯化。实验通过比较6种极性不同的树脂对络塞维的吸附、解吸特性,筛选出最适合用来分离纯化络塞维的大孔树脂。然后通过动态吸附和解吸实验,对工艺条件进行优化。实验结果:HP-20大孔树脂对络塞维具有良好的分离选择性,最佳工艺条件为络塞维加样浓度0.22mg/mL,加样量4倍柱体积(4BV),柱床层高度30cm,洗脱流速2BV/h,并且确定了梯度洗脱的程序为蒸馏水(3BV)、25%乙醇(3BV)、45%乙醇(3BV)、60%乙醇(2BV)。在最佳条件下,大孔树脂HP-20分离纯化得到的络塞维含量从0.69%增加到43.67%,回收率为85.32%。其次,采用高速逆流色谱法制备络塞维单体。进样分析前,对经过大孔树脂分离得到的络塞维粗品经过装有聚酰胺的层析柱,以除去一些黄酮类杂质。选择出合适的溶剂系统,然后对进样量、洗脱流速进行筛选,在最佳条件下放大制备络塞维单体,并且对制备得到的单体物质进行结构鉴定。结果:采用乙酸乙酯-正丁醇-水(1:0.35:1.35,v/v/v)两相溶剂体系在正相模式下,进样量为150mg,进样流速设为1.5mL/min,可以制备出络塞维单体54.8mg,纯度达到98.5%,回收率为99.8%。表明高速逆流色谱法与柱层析法相结合,可以用于制备络塞维单体,是一种非常有效的方法。最后,对于制备得到的络塞维单体成分对其抗疲劳效果进行评价。实验通过测定小鼠力竭游泳时间以及肝糖元、肌糖元、肌乳酸、血红蛋白和血尿素氮含量,来评价其是否具有抗疲劳效果,然后通过测定肝脏中总抗氧化能力,SOD、GSH-Px酶的活性,LDH和MDA含量,以及通过代谢组学实验,初步评价其抗疲劳机理。结果显示,灌喂络塞维可以使小鼠负重游泳时间延长,肌糖元、肝糖元和血红蛋白含量提高,肌乳酸及血清尿素氮的含量水平降低,由此可以判定络塞维具有缓解体力疲劳的作用。另外,服用络塞维组和空白组的尿代谢谱图明显不同,推测络塞维使机体内生物代谢产生一些生物化学变化,这些代谢产物与络塞维抗疲劳作用可能存在某种关联。同时,络塞维可以提高机体抗氧化能力,这种抗氧化能力的提高对长时间运动可能起到一定的保护作用从而更好的发挥出抗疲劳效果。
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