目的:观察NMDA受体亚单位1、2A、2B在早期培养的人胚脑神经干细胞中的表达变化。使用一定剂量的NMDA初步探讨NMDA受体对hNSCs凋亡、增殖的影响。籍以填补hNSCs生物学研究中有关NMDA受体发育和作用方面的空白。 方法: 1．从正常流产人10～12周胚胎海马分离培养、诱导分化、鉴定人胚脑神经干细胞(Human neural stem cells，hNSCs)，血清诱导分化后，用Nestin、β-ⅢTubulin、GFAP免疫细胞化学反应鉴定细胞性质和类型。 2．取原代、一代和二代处于指数生长期的hNSCs，通过免疫细胞化学反应、RT-PCR和Western-blot等方法观察NMDA受体亚单位1、2A、2B(N+Methyl-D-Aspartate receptor subunits 1、2A、2B，NR1、NR2A、NR2B)mRNA和蛋白质的表达变化。 3．取传代培养的hNSCs随机分组：①正常组；②1μM NMDA组；③10μMNMDA组；④30μM NMDA组；⑤100 μMNMDA组。每组取4孔，然后加入NMDA，放在培养箱中继续培养，3天换液。各组在相应时间点，用Hoechst33258进行荧光染色，计算出凋亡率，实验重复3次，以观察NMDA受体对hNSCs凋亡的影响。 4．取传代培养的hNSCs随机分组：①正常组；②1μMNMDA组；③10μMNMDA组；④30μMNMDA组；⑤100μ MNMDA组。每组取8孔，然后加入NMDA，放在培养箱中继续培养，3天换液。各组在相应时间点，用MTT法测定各孔光密度(OD)值，实验重复3次，以研究NMDA受体对hNSCs增殖的影响。 结果采用SPSS13.0统计软件分析，数据以均数±标准差表示(mean±SD)，Western blot数据采用单因素方差分析，多个实验组与一个对照组比较采用最小显著差法(LSD)，实验组之间比较采用q检验。凋亡率数据先用arcsin平方根P转换后进行方差齐性检验，然后行单因素方差分析。以P<0.05表示在统计学上有显著性差异，P<0.01表示在统计学上有极显著差异。 结果: 1．培养的细胞Nestin反应阳性，加入血清诱导分化后，细胞可以分别分化成β-ⅢTubulin、GFAP阳性的细胞，表明分离培养的是hNSCs。 2．hNSCs在原代、一代和二代时，NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B免疫细胞化学反应均呈阳性，且肉眼观察无明显差别：RT-PCR结果提示三种亚单位在不同的时间点mRNA皆稳定表达；Western-blot结果显示，三种亚单位在不同的时间点各自蛋白的表达量基本一致。 3．在3天、7天、12天时，各实验组神经干细胞的凋亡率与正常组相比无明显差异。 4．在NMDA作用3天和7天时，100 μ M组的OD值与正常组相比出现明显增加(p<0.05)，其它各组与正常组相比无明显变化，而且各实验组间也无明显变化。NMDA作甩12天时，30 μ M和100 μ M组的OD值与正常组相比均明显增加(p<0.05)，其它各组与正常组比较无明显增加，而且30 μM和100 μM组间也无明显差别。 结论: 1．从人胚脑海马中分离出的神经干细胞，在培养早期就有NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B的表达。 2．1 μ M、10 μ M、30 μ M和100 μ M的NMDA对hNSCs的凋亡无明显影响，提示hNSCs对兴奋性毒素有较好的耐受性。 3．30 μ M和100 μ M的NMDA使hNSGs/的MTT值明显增加，提示在一定条件下NMDA可以促进hNSCs增殖，NMDA受体与hNSCs的增殖密切相关。