何首乌中二苯乙烯苷的制备及抗氧化机理研究

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何首乌(Polygonum multiflorum Thunb)为蓼科多年生草本植物的块根,是我国传统的延年益寿的中草药。何首乌中主要的功效性成分二苯乙烯苷近年来成为研究的热点。文献报道了其多项生理功能:抗氧化、清除自由基;抗肿瘤;降低胆固醇;抑制动脉粥样状硬化;保护肝脏;具有血管舒张作用;防治老年痴呆;提高记忆等功效。其间以抗氧化、清除自由基性能最为突出。故本课题以贵州何首乌为原料,建立了分离纯化的工艺路线,分离制备得到二苯乙烯苷晶体,深入探讨了二苯乙烯苷抗氧化性能及抗氧化机理,为进一步研究何首乌的药理提供了理论基础。在分析选取何首乌原料后,研究二苯乙烯苷的分离提取工艺。运用溶剂提取、壳聚糖絮凝澄清、大孔吸附树脂分离技术分离纯化何首乌中二苯乙烯苷。首先,通过单因素、中心组合实验,运用响应面分析法优化了水提取工艺条件,得到最佳条件为:固-液比1:15,温度50℃,时间40min。而后,对水提浓缩液选用壳聚糖为絮凝剂进行了澄清以除去蛋白、果胶等大分子杂质,通过正交实验得到最佳条件为:壳聚糖添加量:0.3mg/mL,pH值4.5,温度20℃。最后,对15种大孔吸附树脂进行静态吸附实验,优选出5种吸附率高,解吸效果良好的树脂进行了静态吸附动力学、静态吸附等温线方程的拟和实验,考察了树脂的吸附速率以及溶液浓度与饱和吸附量了的关系,最终选出大孔吸附树脂HPD100作为分离纯化二苯乙烯苷的最佳树脂。继而分别对树脂的动态吸附条件:进样浓度、流速、进样pH值、洗脱溶液进行了优化,最终确定相关柱条件,洗脱方式为先用20%乙醇洗脱除去部分杂质,在用40%乙醇洗脱目标产物二苯乙烯苷,使得最终产物纯度为84.47%,得率为75.12%。应用聚酰胺柱层析系统初步纯化了何首乌的乙醇粗提液,而后通过溶剂结晶技术,首次分离得到了二苯乙烯苷白色针状晶体,液-质(LC-MS)联用测定纯度为99.49%,相对分子质量为406;通过核磁共振分析(NMR)鉴定其结构;并运用X-射线衍射、差示扫描量热分析(DSC)、热重分析(TGA)等技术对晶体性质进行了初步测定,证明二苯乙烯苷不存在同质多晶现象,仅有一种针状晶体存在形式,且不含结晶水,熔点为151.33℃。以BHT、Vc、白藜芦醇(RE)为对照,分别对二苯乙烯苷(SG)、大孔吸附树脂分离样品(RF-SG)、何首乌粗提物(C-SG)体外抗氧化性能进行测定。考察了亚油酸体系抗氧化性,还原性,DPPH自由基、超氧阴离子、羟自由基、H2O2清除能力以及金属鏊合性。得出结论:从何首乌中提取的不同纯度的二苯乙烯苷样品均具有抗氧化、清除自由基功能。其活性强弱依次为SG、RF-SG、C-SG。与常用抗氧化剂BHT、Vc对照,SG亚油酸体系抗氧化性、还原性、清除DPPH自由基能力相对较弱;而清除超氧阴离子、羟基自由基、H2O2能力要高于BHT、Vc。而与结构相似的RE对照,SG优于RE,原因是在结构上SG比RE多形成了一个(2-O-Glu)糖苷;由此2-糖苷的推电子效应,可以使对位羟基(C5-OH)所形成的苯氧自由基更为稳定,以便终止自由基链反
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