研究背景与目的:　　ABO血型系统是移植医学最重要的血型系统，ABO 血型的相容性直接关系到治疗成功与否。近年来，由于临床上血液制品及器官供应严重匮乏，常常需要采用ABO血型部分相容甚至不相容的血液或者器官进行移植治疗。在这种情况下，提前检测供受体ABO血型抗体含量便尤为重要。然而，目前临床及科研中对于ABO血型抗体的检测主要为基于效价的半定量测定，该方法准确性差、操作繁杂、难以实现高通量自动化检测，越来越多的研究证明这种半定量检测已不能满足临床科研需求。本研究旨在建立定量检测人血IgM型抗-A抗体的免疫学方法。首先制备特异性血型A抗原，进一步构建定量检测IgM型抗-A抗体ELISA检测方法，并对其进行系统性方法学评价，在此基础上对 162 例健康人群 IgM 型抗-A 抗体含量按照性别、年龄、血型、及献血次数进行分组检测，初步探讨该方法的临床应用价值。　　研究方法:　　1、 血型A抗原的制备　　采用经典方法制备A型红细胞血影，利用蛋白包涵体处理技术对血影进行变性溶解及复性，并以鼠单克隆抗体及野生型多克隆抗体为工具，通过血凝抑制试验验证其特异性免疫反应活性，为进一步构建间接ELISA奠定基础。　　2、 间接ELISA检测方法的构建　　以血型A抗原作为固相包板抗原，HRP标记羊抗人 IgM 抗体作为反应二抗，初步构建IgM型抗-A抗体间接ELISA检测方法。采用方阵滴定实验设计，优化包括包板抗原浓度、待检血浆稀释比例、封闭液及稀释液种类在内的四组间接ELISA中的关键反应参数，以实现该ELISA方法的最大检出能力。　　3、 定量检测方法的构建及方法学评价　　采用人IgM免疫球蛋白作为定量标准品，优化标准曲线浓度范围，建立人血IgM型抗-A 抗体定量间接 ELISA 检测方法，并对其检测灵敏度、特异性、准确性、重复性等进行系统性方法学评价。　　4、 初步临床应用　　采用已建立的定量ELISA对162例健康人群IgM型抗-A抗体进行检测，通过年龄、性别、血型、献血次数进行分组，采用SPSS统计学软件分析IgM型抗-A抗体人群分布差异，实现本研究自建定量间接ELISA的初步临床应用。　　研究结果:　　1、成功制备了特异性的血型A抗原，蛋白浓度为4.3mg/mL。　　2、成功构建了IgM型抗-A抗体ELISA检测方法，通过方阵滴定优化实验，包板抗原浓度为2mg/mL，检测血浆1:10稀释时为本ELISA体系最佳配伍；当封闭液采用3%Gelatin，稀释液采用10%NBS时，为本ELISA体系最适合的封闭-稀释系统。　　3、建立的定量ELISA线性检测范围为0-0.4?g/mL；批内及批间变异系数均小于10%，有较好的重复性；采用ROC曲线对自建方法进行评价，本试验AUC值为0.947 （95%置性区间为0.897-0.998），检测的灵敏度为87.7%，检测的特异性为100%，该方法具有较高的检测准确性； 通过随机选取57例B型血浆样本，与金标准试管法抗体效价进行平行检测，SPSS统计分析两组检测结果具有强相关性（r=0.71，P＜0.01），进一步验证了本ELISA体系检测结果的可靠性。　　4、通过对162名健康献血员进行检测发现，O型血人群IgM型抗-A抗体浓度显著高于 B 型血人群（P=0.005），青年人群 IgM 型抗-A 抗体浓度显著高于中老年人群（P=0.011）,而性别差异及献血行为对IgM型抗-A抗体分布没有影响（P＞0.05）。　　研究结论:　　1、成功构建了定量检测人血IgM型抗-A抗体间接ELISA检测方法，通过系统评价，该方法灵敏度高、特异性强、重复性好、准确性高，为后续血型抗体相关研究奠定了基础。　　2、经初步检测，O血型人群及青年人群IgM型抗-A抗体浓度含量相对较高，而性别及献血行为与IgM型抗-A抗体浓度含量无相关性。