【摘 要】
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目的:前期研究发现Gnb2ll基因编码的蛋白能够与近日节律系统的核心元件PERIOD1蛋白相互作用。本文研究Gnb2ll基因及其蛋白在大鼠体内外的近日节律特征。包括二部分:1、体外研究
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目的:前期研究发现Gnb2ll基因编码的蛋白能够与近日节律系统的核心元件PERIOD1蛋白相互作用。本文研究Gnb2ll基因及其蛋白在大鼠体内外的近日节律特征。包括二部分:1、体外研究:研究大鼠C6细胞中Gnb2ll基因是否存在节律性表达,并观察Gnb2ll是否与Per1一样对刺激产生立早反应。2、体内研究:观察Gnb2ll基因及其蛋白在大鼠体内是否存在节律性表达。方法:实验一:体外研究分别采用PMA (Phorbol 12-Myristate 13-acetate, 12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐)及马血清刺激体外培养的小鼠NIH-3T3细胞,RT-PCR检测不同时间点mPerl mRNA的表达水平,比较两者的诱导效率;PMA刺激体外培养的大鼠C6神经胶质瘤细胞,RT-PCR检测不同时间点rPerl,rDbp mRNA的表达水平。在确定C6细胞具有近日节律特征后,RT-PCR检测不同时间点rGnb2ll mRNA的变化规律。实验二:体内研究12D/12L光暗循环下,采用半定量RT-PCR的方法观察大鼠脑组织及肝脏组织的Gnb2ll,Perl mRNA的变化规律;采用WesternBlot方法检测大鼠脑组织及肝脏组织中Gnb2ll编码蛋白、PER1蛋白在不同时间点的变化。结果:实验一:体外研究PMA及50%的马血清均能诱导NIH-3T3细胞mPerl的近日节律表达且诱导效率近似;C6细胞的rPerl,rDbp基因表达呈近日节律,同时PMA刺激的C6细胞的rGnb2ll的表达也呈近日节荡,并且与Perl一样对刺激产生立早反应。实验二:体内研究12D/12L光暗循环下,大鼠脑组织及肝脏组织中Gnb2ll mRNA和节律基因Perl mRNA及其蛋白产物均呈近日节律。结论:PMA是一种有效的体外节律诱导剂;经PMA诱导后,C6细胞表现出近日节律特征,Gnb2ll的mRNA存在着近日节律,并且是一种立早基因。在大鼠体内,Gnb2ll基因及其编码的蛋白也存在着近日振荡。通过体内外实验,可以看出Gnb2ll存在着广泛的近日节律性振荡,其相位总在节律基因Perl之前。由于Gnb2ll基因编码的蛋白RACK1是一种重要的接头分子,参与了PKC信号通路,而Perl基因的启动子又可以被PKC通路激活,因此RACK1蛋白很可能是Perl的上游调控分子,参与激活了Perl基因的启动子。
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