辣椒对象耳豆根结线虫的抗性评价及抗病机理研究

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近年来,象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii)已发展为海南地区辣椒生产的主要病害之一。培育新的抗病品种是防治该病害最为绿色经济有效的一种方法。本研究通过对42份一年生辣椒和53份中国辣椒种质资源进行象耳豆根结线虫抗性评价,筛选出抗性种质,并通过对比抗感种质受到象耳豆根结线虫侵染后根内线虫发育情况以及生理生化指标的活性变化,结合转录组测序分析的研究手段,挖掘与象耳豆根结线虫抗性紧密相关的代谢通路和基因,探索辣椒抗象耳豆根结线虫的机理,为未来抗根结线虫品种的选育奠定坚实的基础。主要研究结果如下:1.42份一年生辣椒种质和53份中国辣椒种质中,共计8份种质表现为高抗,其中包含2份一年生辣椒种质和6份中国辣椒种质;32份辣椒种质表现为抗病,其中包含6份一年生辣椒种质和26份中国辣椒种质;37份辣椒种质表现为感病,其中包含18份一年生辣椒种质和19份中国辣椒种质;18份辣椒种质表现为高感,其中包含16份一年生辣椒种质和2份中国辣椒种质。2.无论在一年生辣椒还是中国辣椒中,感病种质根系内线虫数量和线虫发育速度都远高于抗病种质,感病种质中象耳豆根结线虫在侵入后第7天就发育成三龄幼虫,在观察期结束前都发生了二次侵染,而抗病种质在接种10天后才发育成三龄幼虫,在观察期结束前并无产卵现象甚至无法发育成为成虫。3.通过测定一年生辣椒与中国辣椒抗感种质接种象耳豆根结线虫后第0、3、6、9、12、15、20、25、30天根系多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)活性和木质素含量,发现抗感种质PPO活性整体趋势相近,但是抗病种质活性高于感病种质,且峰值出现较早。一年生辣椒中抗病种质与感病种质PAL活性除峰值存在明显差异外,其他时间点无明显区别,而中国辣椒中PAL活性感病品种普遍高于抗病品种。对于POD活性变化,一年生辣椒在接种后感病品种的POD活性普遍高于抗病品种,而中国辣椒在接种12天内,抗病品种的POD活性高于感病品种,在12天后则是感病品种高于抗病品种。木质素含量的变化则整体呈上升趋势,且实验组上升趋势远大于对照组,抗病种质大于感病种质。说明不同生理生化指标均会受到象耳豆根结线虫的侵染而发生改变,这些指标也会影响象耳豆根结线虫的侵染。4.通过对中国辣椒抗感种质接种象耳豆根结线虫第0、3、6、9天根系样本进行转录组测序,共计得到高质量序列156.8G,Q20均在97%以上,Q30均在92%以上,将测序结果与中国辣椒参考基因组进行比对,所有样本都有80%以上的序列与参考基因组比对成功,将Unigene序列比对到Pfam、GO、KEGG等功能数据库进行注释,共有77352条Unigene被注释,通过基因差异表达筛选每个组合的差异表达基因。DEGs的GO功能富集分析表明转录因子活性、水解酶活性、氧化还原酶等基因位点与抗根结线虫病存在关联。通过DEGs的KEGG通路富集分析发现主要差异表达基因被富集在苯丙素的生物合成、植物激素信号转导、植物病原菌互作、类黄酮生物合成等代谢通路上,并从差异表达基因中筛选出了部分存在显著差异的基因位点。
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