新生儿缺氧缺血性脑损伤(Hypoxic-Ischemic Brain Damage,HIBD)是指由于围生期的窒息缺氧所导致的脑损伤,轻症者预后良好,中重症者常遗留视听障碍、智力障碍、脑瘫、癫痫等神经系统后遗症,是导致儿童神经系统损伤的主要原因,但目前尚无有效的治疗方法,给整个社会及家庭带来沉重的负担。因此,寻找治疗新生儿HIBD及降低其后遗症发生率的有效方法成为医学工作者关注的焦点。　　 神经胶质细胞(neuroglial cell)是神经组织中除神经元以外的另一大类细胞,星形胶质细胞(astrocytes,AS)作为神经胶质细胞的一种类型,在数量上占有绝对的优势,约为神经元的10～50倍,星形胶质细胞一度被认为是大脑的填充物,对神经元仅起营养、支持、保护和绝缘的作用,在神经系统中担任着次要的、被动的角色。近年来人们对星形胶质细胞的形态结构及功能进行了较为广泛的研究,发现它在神经系统发育、神经组织修复与再生、神经免疫及突触传递等方面都起着十分重要的作用,使我们对其有了重新的认识。　　 目的：电刺激小脑顶核(fastigial nucleus electrical stimulation,FNS)作为一种促进神经功能恢复的物理疗法拓展了脑损伤治疗的新途经,而且采用仿生物电技术,模拟实验性FNS而研制的小脑电刺激仪,已广泛应用于成人脑缺血疾病的治疗并取得了较满意的疗效。目前关于FNS对新生儿HIBD的研究多集中于神经元上,对神经胶质细胞的研究尚少,基于星形胶质细胞在神经系统中的重要作用,本实验在建立HIBD新生大鼠模型的基础上,电刺激小脑顶核,通过观察大鼠脑组织海马区星形胶质细胞超微结构的变化、检测胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillaryacidic protein,GFAP)表达的变化来探讨电刺激小脑顶核对新生儿HIBD的脑保护作用。　　 材料与方法：　　 1.实验动物分组及HIBD模型的制备新生7日龄健康清洁级SD大鼠180只,雌雄不限,体重13-16g,随机分为假手术组、模型组和电刺激组,每组各60只,各组于制模术后又按3天、7天、14天、21天随机分为4组,每组各15只。采用改良的的RICE法:以新生7日龄SD大鼠为研究对象,乙醚吸入麻醉后,分离并结扎左侧颈总动脉后,遂置于缺氧箱中,持续充以气流量为2L·min-1的92:8氮氧混合气体2小时,大鼠出现左旋夹尾者则证明模型制备成功,可纳入实验。　　 2.电刺激干预　　 电刺激组大鼠于术后第2天开始给予电刺激治疗,电刺激大鼠耳后部小脑顶核(相当于人体的双侧乳突部),30分钟／次,1次／天,电刺激强度为3.5V、频率50HZ,使大鼠肢体稍有震颤为宜。假手术组及模型组大鼠不予电刺激治疗,相应时间点仅予抓捕固定。　　 3.标本采集与制备各组分别于术后3天、7天、14天、21天随机取5只大鼠经乙醚吸入麻醉后,剪开胸腔暴露心脏,剪开右心耳建立循环通道,先以生理盐水快速灌注冲洗至右心耳流出澄清液体,随即换用40g／L多聚甲醛-5g／L戊二醛混合液内固定,沿颈部断头后迅速取左海马切成1mm×1mm×1mm大小,遂将其置于40g／L戊二醛溶液中固定保存,应用透射电镜观察大鼠海马区星形胶质细胞的超微结构。其余大鼠于同样的时间点经乙醚吸入麻醉后,心脏灌注40g／L多聚甲醛固定脑组织,断头取脑,做冠状切片,应用HE染色观察大鼠脑组织病理形态学改变,免疫组化检测大鼠海马区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。　　 4.脑组织海马区星形胶质细胞的超微结构将电镜样本经PBS液冲洗后,放入1％锇酸中后固定,经脱水、包埋、聚合、50nm超薄切片、醋酸铀和柠檬酸铅双重电子染色后,应用日立H-7500型透射电子显微镜观察星形胶质细胞超微结构的变化。　　 5.脑组织海马区HE染色及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达光镜下观察大鼠脑组织海马区病理形态学变化。　　 胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性表达呈棕黄色,用彩色病理图像分析系统测量切片海马区GFAP积分光密度值,每张切片取5个视野测量,取其平均积分光密度值。　　 6.统计学分析　　 应用SPSS16.0统计软件分析,数据均以(x)±s表示,多组均数比较用单因素方差分析,组间两两比较用最小显著差异(LSD)检验,以α=0.05作为显著性检验水准。　　 结果：　　 1.大鼠脑组织海马区星形胶质细胞的超微结构模型组大鼠脑组织海马区星形胶质细胞胞质水肿,线粒体大部分嵴和膜融合,游离核糖体减少,核异染色质增加,边集于核膜下,粗面内质网不同程度脱颗粒；电刺激组大鼠海马区星形胶质细胞肿胀减轻,胞质中细胞器丰富,包括线粒体、粗面内质网及溶酶体,核膜清晰。　　 2.大鼠脑组织海马区HE染色假手术组大鼠海马区神经细胞排列整齐,形态正常,胞质丰富,胞浆染色均匀,细胞核清楚,核仁明显；模型组大鼠海马区锥体细胞排列紊乱,可见明显的坏死灶,神经细胞数量明显减少,部分神经细胞胞体缩小为三角形,核浓缩深染,核仁消失。电刺激组大鼠海马区神经细胞排列有序,变性坏死较少,多数细胞形态相对正常,细胞核清楚。　　 3.胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学方法染色模型组及电刺激组大鼠3天时GFAP的平均积分光密度值与假手术组比较即有升高且有统计学意义(p<0.05),7天、14天、21天时GFAP的平均积分光密度值仍较假手术组高,且在7天时达到高峰,电刺激组GFAP的平均积分光密度值在各时间点均较模型组同时间点低且有统计学意义(p<0.05)。　　 结论：　　 (1)电刺激小脑顶核可减轻星形胶质细胞的结构性损伤。　　 (2)电刺激小脑顶核可抑制星形胶质细胞的过度增生。