【摘 要】
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目的探讨microRNA-424（322）-5p（miR-424（322）-5p）在大鼠角膜新生血管（Corneal neovascularization,CorNV）形成中的作用及机制。方法1.30只SD雌性大鼠按不同时间段随机分组,其左眼为实验组,对侧眼为对照组,并通过缝线法诱导构建大鼠CorNV模型,取建模后第0、4、7、14天的角膜组织,通过HE染色、免疫组化（immunohistoche
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目的探讨microRNA-424（322）-5p（miR-424（322）-5p）在大鼠角膜新生血管（Corneal neovascularization,CorNV）形成中的作用及机制。方法1.30只SD雌性大鼠按不同时间段随机分组,其左眼为实验组,对侧眼为对照组,并通过缝线法诱导构建大鼠CorNV模型,取建模后第0、4、7、14天的角膜组织,通过HE染色、免疫组化（immunohistochemistry,IHC）观察角膜结构、血管新生及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白表达;RT-PCR检测建模后第14天角膜中的miR-424（322）-5p及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达。2.脂质体转染人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）,分为miR-424（322）-5p模拟物（miR-424（322）-5p mimic）组、阴性对照（miR-424（322）-5p Negative Control,NC）组、空白对照（control,CON）组;miR-424（322）-5p抑制物（miR-424（322）-5p inhibitor）组、阴性对照（miR-424（322）-5p inhibitorNegative Control,NC）组、空白对照（control,CON）组。3.RT-PCR检测miR-424（322）-5p转染效率,CCK-8、划痕实验、Transwell实验、Matrigel胶成管实验分别检测各组HUVECs的增殖、迁移、成管能力。4.Western blot检测各组VEGF及Raf/MEK/ERK通路的蛋白相对表达量。结果1.实验成功构建了大鼠CorNV模型,其角膜组织HE染色切片显示:与对照组比较,实验组第4、7、14天的角膜结构混乱,水肿逐渐加重,新血管逐渐形成,炎症细胞逐渐增多。2.免疫组化（IHC）结果显示:较对照组而言,实验组均有VEGF蛋白的表达,呈棕黄色。3.RT-PCR结果显示建模第14天后的大鼠角膜组织中的miR-424（322）-5p及VEGF mRNA的表达显著增高（P<0.01）。4.通过脂质体转染HUVECs后的miR-424（322）-5p mimic组的miR-424（322）-5p的表达量显著高于NC组和CON组（P<0.01）,其CCK-8、划痕实验、Transwell实验及Matrigel胶成管实验结果表明miR-424（322）-5p mimic组的HUVECs的增殖、迁移及成管能力显著高于NC组和CON组（P<0.01）;通过脂质体转染HUVECs后的miR-424（322）-5p inhibitor组的miR-424（322）-5p的表达量显著低于NC组和CON组（P<0.01）,其CCK-8、划痕实验、Transwell实验及Matrigel胶成管实验结果表明miR-424（322）-5p inhibitor组的HUVECs的增殖、迁移及成管能力低于NC组和CON组（P<0.01）。5.Western blot结果显示,与NC组和CON组相比,miR-424（322）-5p mimic组的VEGF及Raf/MEK/ERK通路蛋白相对表达量具有显著增高（P<0.01）;与NC组和CON组相比,miR-424（322）-5p inhibitor组的VEGF及Raf/MEK/ERK通路蛋白的相对表达量显著降低（P<0.01）。结论大鼠CorNV中miR-424（322）-5p及VEGF mRNA的相对表达量上调;miR-424（322）-5p可能通过激活VEGF及Raf/MEK/ERK通路,促进HUVECs的迁移、增殖及成管能力,从而参与CorNV的形成。
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