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目的: 利用人脐带血干细胞多向分化潜能,探讨其对骨缺损愈合影响的研究 方法: 1.建立SD大鼠骨缺损动物模型:以SD大鼠作为研究对象。通过手术截骨造成5mm×5mm骨膜-骨干缺损,建立SD大鼠胫骨骨干骨缺损动物模型。 2.实验分组:手术造成骨缺损并在骨缺损处植入脐带血干细胞和明胶海绵的胫骨干作为治疗组、取行手术造成骨缺损仅植入明胶海绵的胫骨干为对照组,仅作手术切口并缝合为假手术组。标本获取:术后12周时间点处死假手术组、对照组及治疗组SD大鼠,完整取出胫骨骨干。 3.人脐带血干细胞培养及传代培养:通过联合培养法体外扩增培养人脐带血干细胞(由内蒙古妇幼保健医院提供),并利用地塞米松等物质诱导人脐带血干细胞进行成骨分化,为其作为种子细胞提供理论基础。传代培养脐带血干细胞。 4.验证骨缺损愈合;细胞移植术后8、12周摄片,条件:电压12V分别拍摄胫骨正侧位X线片,以动态观察骨痂生长。8周时抽取假手术组、对照组及治疗组大鼠静脉血标本,检测骨碱性磷酸酶评估其成骨能力。通过免疫组化测定骨保护素orthopantomography(OPG),血管内皮生长因子 vascular endothelial growth factor(VEGF)、骨形态发生蛋白 Bone morphogenetic protein-2(BMP-2)及BMP-7从分子学角度衡量骨生长状况。 结果: 1.与对照组相比,治疗组形成原始骨痂较早,I型胶原蛋白含量较对照组增加。 2.对照组和治疗组SD大鼠在骨缺损愈合过程中均有OPG、VEGF、BMP-2及BMP-7表达,并且治疗组OPG、VEGF、BMP-2、BMP-7表达较对照组明显增多。且随着骨缺损愈合OPG、VEGF、BMP-2、BMP-7表达达到最高值,并且持续稳定表达。 结论: 1.手术干预SD大鼠胫骨骨缺损造模成功。 2.骨保护素(OPG)、血管内皮生长因子(VEGF)、骨形态发生蛋白(BMP-2、BMP-7)在骨缺损生长过程中治疗组、对照组及假治疗组中均有表达; 3.治疗组SD大鼠骨生长过程中OPG、VEGF、BMP-2及BMP-7表达较对照组明显增高。