胞质内精子注射（ICSI）是一种新的体外受精(IVF)方法。作为人类辅助生殖技术（ART），已经在人上成功应用于男性因素不孕症和常规体外受精周期失败的治疗，在奶牛和其它一些动物上，主要应用于性控胚胎的生产和克隆、转基因等方面的研究。　　 本研究对ICSI技术在奶牛性控胚胎生产中的应用进行了探讨和研究，分析了奶牛性控胚胎生产的现状、途径和方法，研究了体外成熟培养卵母细胞冷冻保存、X精子冷冻保存、卵子质量等级以及激活方法等因素对ICSI卵体外发育的影响，试图为奶牛性控胚胎的生产和应用提供实践和理论基础。　　 研究分为三个部分,结果如下:　　 第一部分 奶牛卵母细胞体外成熟培养　　 试验一 卵母细胞分级体外成熟培养　　 根据COCs形态划分等级后进行体外成熟培养，Ⅳ级COCs的成熟率为17.25％，低于Ⅰ级（61.17％）、Ⅱ级（48.83％）和Ⅲ级（46.77％），差异极显著（P<0.01)。而Ⅱ级、Ⅲ级成熟率低于Ⅰ级且差异显著（0.010.05)；B、C、D三组的平均成熟率为55.45％，高于试验一中的平均成熟率52.38％，但差异不显著（P>0.05)。　　 试验三未成熟卵母细胞冷冻保存后体外成熟培养　　 未成熟卵母细胞冷冻保存解冻后进行成熟培养的成熟率为36.45％，极显著低于对照组52.38％（P<0.01)。结果表明冷冻保存不利于未成熟卵母细胞的体外成熟。　　 第二部分卵母细胞胞质内显微注射（ICSI）　　 试验四性别分离精液冷冻保存对ICSI卵早期外体发育的影响　　 性控冻精（A组）和新鲜精液（B组）用于ICSI时，两者的注射卵受精率、卵裂率和囊胚率分别为(79.4％与80.3％)、(87.5％与87.3％）和(24.1％与26.3％)，差异均不显著（P>0.05）。结果表明，精液分离后冷冻保存虽然可能会对精子造成损伤，但并不影响注射卵的受精、卵裂和胚胎早期发育。　　 试验五卵母细胞冷冻保存对ICSI卵早期体外发育的影响　　 试验对成熟卵冻融组（ⅱ组）和未成熟卵冻融组（ⅰ组）以及对照组（试验四中A组）ICSI后的效果进行比较，ⅱ组的受精率为58.5％，低于ⅰ组（79.7％）和对照组（79.4％），差异极显著P<0.01；ⅱ组的卵裂率（80.2％）和囊胚率（21.9％）均低于ⅰ组（88.1％、25.4％）和对照组（87.5％、24.1％），但无显著性差异（P>0.05)；ⅰ组与对照组相比，受精率、卵裂率和囊胚率均无显著性差异（P>0.05)。实验表明，成熟卵母细胞冷冻保存会显著降低ICSI效率，而未成熟卵先冷冻保存再经体外培养至成熟，则对ICSI效率无显著影响。　　 试验六卵子质量等级对奶牛ICSI效果的影响　　 采用I、II、III级卵母细胞进行ICSI时，穿刺卵受精率、卵裂率和囊胚率均无显著性差异（P>0.05），总体效果I>II>III，其中I级卵母细胞行ICSI后的效果最好；Ⅳ级卵母细胞ICSI后的受精率极显著低于I、II级(P<0.01)，显著低于III级(0.010.05）。可见，卵子质量等级对ICSI效果有一定影响，ICSI效率随着卵母细胞质量等级的下降呈下降趋势。　　 第三部分ICSI卵的早期体外培养　　 试验七6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)不同作用时间对ICSI卵早期发育的影响　　 穿刺卵在含1.9 mmol/L 6-DMAP的培养液中孵育1h（B组）、3h（C组）、5h（D组）后的受精率、卵裂率和囊胚率均高于对照组（A组，0h），且差异极显著(P<0.01)；C组和D组的受精率和囊胚率均高于B组，但差异不显著(P>0.05)；但两组的卵裂率均显著高于B组（0.01