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诱导移植免疫耐受是近年来器官移植领域的焦点课题。移植免疫耐受就是诱导受体对供体组织抗原产生特异性免疫耐受，它是指机体免疫系统对特定抗原表现出特异性免疫无应答或低应答状态，而对第三者抗原仍具有正常免疫应答反应，这有别于免疫抑制疗法和遗传缺陷所致的非特异性免疫抑制或无反应性。许多学者从动物实验上都论证了造血干细胞嵌合体诱导供者特异性免疫耐受的可行性，但应用于临床者却成功甚少。本课题作为临床前实验研究，其目的在于：（1）通过比较多种不同的预处理方案，旨在筛选出一种具有低毒性、切合临床实验、能诱导长期稳定的供者特异性移植耐受等优点的围术期预处理方案。为进一步临床应用提供坚实、可靠的理论与实验依据。（2）探讨移植早期残余宿主抗供者抗原的成熟T细胞在急性排斥反应、造血干细胞增殖与免疫耐受中的作用，以更好地指导临床建立有效、可行的诱导免疫耐受治疗方案。本研究分二部分： 1、不同方案诱导同种异基因心脏移植术后长期耐受的比较——临床前实验研究。 建立小鼠耳后心脏移植模型。采用全身X线照射（TBI）、注射抗胸腺细胞血清（ATS）与输注供者C57BL/6小鼠（H-2Kb）骨髓细胞（50×106）等不同组合，给予受者BALB/C小鼠（H-2Kd）进行不同预处理方案治疗，共11组，然后进行心脏移植，术后没有给任何其它免疫抑制治疗。显微镜下（×10倍）观察移植心脏跳动情况，心跳完全停止视为排斥反应，并取下移植心脏送病理检查。骨髓移植后28天常规检测外周血中嵌合体。结果：（l）移植心脏存活时间的比较:给予ATs+亚致死量TBI（450cGy）+骨髓移植（BMT）联合预处理组，效果最好，9/10移植心脏存活时间超过100天，一/10存活69天;与致死量TBI（sooeGy）+BMT组相比，没有显著性差异（p>0.05）。而TBI（45oeGy）+BMT组的移植心脏平均存活时间仅22.1士9.4天，与前2组对比呈显著性差异（P<0.001）。其它仅给Al，S或/和TBI、ATS+BMT等预处理的对照组，其移植心脏均在早期出现排斥反应（<45天）。（2）外周血嵌合体分析:给予TBI（450/sooeoy）+BMT与灯s+TBI（45OeGy）+BMT预处理组，BMT后28天均完全异体细胞嵌合（eompleteehilnerism），嵌合率>99%，它们之I句无显著性差异（p>0.05）。但TBI（SOocGy）+BMT与ATS+TBI（45oeGy）+BMT组的嵌合体中，供者T细胞比例明显高于TBI（45oeGy）+BMT组，呈显著性差异（P<0.01），说明前两红L预处理方案易于使供者T细胞增殖。Al，S+BMT（无TBI）组，术后28天未能检测{1日沃合体，说明单纯使用ATS将导致嵌合体过早地消失。在对照组中，TBI（450cGy）预处理组，术后28天血中T细胞比例明显低于单独ATS（无TBI）预处理组，呈显著性差异（P<0.01），说明TBI可以有效地杀伤受体内T细胞。 2、移植早期宿主成熟T细胞灭活在诱导免疫耐受中的作用 第一部分中TBI（450cGy）十BMT预处理组，尽管术后28天血中形成了完全异体细胞嵌合，但其移植心脏却出现急性排斥反应，平均存活时间仅22.1土9.4天，这结果与较多的临床报道很类似。所以探讨其原因，将对临床应用具有着重要的实际应用价值与指导意义。 方法:（l）受体BALB/C小鼠分三组，分别给予TBI（80oeGy）+BMT、TBI（45OeGy）+BMT、AfS+TBI（450eGy）+BMT三种不同的方案，分别于BMT后第7、14、21、28、42天检测其外周血、脾脏、胸腺中嵌合体。 （2）取第一部分中TBI（45oeGy）+BMT+HT（do）组的部分排斥心脏标本，送作免疫组织化学染色检查。（3）分别以T细胞敲除小鼠（C57BL/6 TcR。一Ko）与正常C57BL/6小鼠作为受体，给予同样的TBI（450eGy）+BMT预处理，然后进行心脏移植。BMT后28天常规检测血中嵌合体。 结果:（1）BMT后早期（第7天）:TBI（45OeGy）+BMT组在外周血与脾脏中均可看到明显的受者本身T细胞存活（分别为0.23%与0.37%），在胸腺中受者身身细胞约占99%;而TBI（800cGy）+BMT与ATs+TBI （45ocGy）+BMT两组在外周血中几乎见不到受者T细胞（<0.02%），在脾脏中仅见到极少数受者T细胞（0.05%），在胸腺中已出现较多的供者细胞嵌合（约30%）。（2）从TBI（45ocGy）+BMT组的排斥心脏组织病理检查中可以发现，H一ZKd阳性+TCR Qp阳性的受者BALB/C小鼠T细胞浸润在排斥的心脏组织中，说明这些残余的宿主T细胞参与了急性排斥反应。（3）给TBI（45OeGy）+BMT预处理的受者e57BLz6 TCRa一ko小鼠组，其移植，自脏全部获得长期存活（>l 00天），BMT后28天获完全异体细胞嵌合，嵌合率>99.4%;而给予同样预处理的正常C57BL/6小鼠组其移植心脏存活时间仅23.9土13.3天，BMT后28天嵌合率体形成不稳定，平均嵌合18.6%，其中大多数（7/10）嵌合率<lO%。两者均呈显著性差异（P<0.001）。这结果表明:无T细胞宿主可以使供者造血干细胞在同等预处理条件下易于植活，形成较稳定的嵌合体，诱导供者特异性长期耐受。 以上的实际结果提示:（l）持久的供者造血干细胞嵌合体是诱导供一一受者特异性长期、稳定免疫耐受的重要条件。（2）移植早期彻底清除或灭活受体抗供者抗原的成熟T细胞，不但有利于避免早期急性排斥反应，而且有利于供者造血千细胞植活，以获