FoxO3基因属于Fox基因家族中的一员,在机体内主要起到转录因子的作用,其本身可以被磷酸化、乙酰化、泛素化等多种方式进行翻译后修饰,在体内分布广泛,心脏、脑、脾脏、肾脏、睾丸、卵巢、骨骼肌、脂肪等组织中均有分布,可以参与到多种信号通路中,比如PI3K/AKT、AMPK等,对于调控细胞凋亡、自噬、增殖、分化,调节氧化应激等方面具有重要作用。目前关于FoxO3在雌性动物生殖方面的作用还局限在人、鼠、猪等哺乳动物中,对雌性禽类生殖调节起到怎样的作用,目前仍不了解。课题组前期研究发现,FoxO3在产蛋期和休产期鹅卵巢组织中存在差异表达。为更好地了解FoxO3在雌禽生殖中发挥的作用,本研究检测了产蛋周期不同阶段鹅等级前卵泡中FoxO3、凋亡及自噬相关基因的表达变化情况,构建了FoxO3基因的真核表达载体,将其转染至鹅卵泡颗粒细胞中,检测其对细胞凋亡和自噬相关基因m RNA表达水平的影响。本研究首先采集开产前、产蛋初期和产蛋高峰期母鹅的卵巢组织,分离等级前卵泡,利用荧光定量PCR(q RT-PCR)方法检测FoxO3及多个凋亡和自噬相关基因的表达;然后根据NCBI中收录的鸿雁(Anser)FoxO3基因序列设计引物,扩增鹅FoxO3基因的CDS序列后,将纯化的FoxO3目的片段与p MD18-T载体连接,构建p MD18-T-FoxO3重组质粒,利用HindⅢ与NheⅠ双酶切,将目的片段与pc DNA3.1-myc载体连接,构建pc DNA3.1-myc-FoxO3重组表达质粒,利用瞬时转染法将其转入鹅原代卵泡颗粒细胞中,利用q RT-PCR方法对凋亡和自噬相关基因进行检测。结果发现,FoxO3在产蛋前后均有表达,且在产蛋初期和产蛋高峰期都随着卵泡直径的增加而升高;Bcl2、Bax、Caspase3、Fas、Fasl、LC3、Beclin1等凋亡和自噬主要相关基因在不同等级前卵泡中均有表达,其中Caspase3和Bax随着卵泡直径增加表达量不断增大,LC3表达量随着卵泡直径变大不断减小,其他基因随着卵泡直径增大发生动态变化,而FoxO3过表达后,Bax、Bcl2、Caspase3、Fasl表达量均明显上升,LC3表达量明显下降,Beclin1有明显下降趋势。本研究表明在产蛋前后及产蛋不同时期,FoxO3及细胞凋亡和自噬相关基因FoxO3、Caspase3、Bax、LC3和Fas/Fasl的表达水平随着卵泡直径的变化呈动态变化,FoxO3过表达后可影响鹅原代卵泡颗粒细胞中凋亡及自噬基因m RNA水平的表达。本研究结果将为进一步探究FoxO3基因对禽类卵泡发育及卵泡闭锁的作用奠定基础。