论文部分内容阅读
目的:观察补肾填髓方干预Aβ25-35影响的C6大鼠胶质瘤细胞中以BDNFmRNA标靶的miRNA-206-3p表达的影响,探讨补肾填髓法的抗痴呆作用及其可能的机制,为指导临床应用和开发新药提供理论和实验依据。方法:1.含药血清的制备:将健康SD大鼠,随机分为空白血清组和补肾填髓方组,各组动物给予相应药物或生理盐水灌胃。其中补肾填髓方低、高剂量组灌胃浓度为1:6,后取血、离心备用。2.C6细胞的培养:将C6细胞进行培养,取对数生长期细胞进行实验研究,以β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)处理制备阿尔茨海默病细胞模型。分为空白血清组、模型组、低剂量BSTSF组、高剂量BSTSF组。3.实时荧光定量PCR观察各组BDNF mRNA及miRNA-206-3p mRNA表达的差异。4.Western Blot检测各组BDNF蛋白的表达。结果:1.实时荧光定量PCR反应BDNF mRNA、miRNA-206-3p mRNA比较:与空白血清组比较,模型组BDNF mRNA显著下降（P<0.01）;与模型组比较,补肾填髓方低、高剂量含药血清组BDNF mRNA均显著上升（P<0.05,P<0.01）。与空白血清组比较,模型组miRNA-206-3p mRNA显著上升（P<0.01）;与模型组比较,补肾填髓方低、高剂量含药血清组miRNA-206-3p mRNA均显著下降（P<0.05,P<0.01）。2.Western Blot检测BDNF蛋白结果:与空白血清组比较,模型组BDNF蛋白表达显著下降（P<0.01）;与模型组比较,补肾填髓方低、高含剂量药血清组BDNF蛋白表达均显著上升（P<0.05,P<0.01）。结论:1.AD细胞模型中BDNF蛋白、BDNF mRNA表达水平下降,miRNA-206-3p mRNA表达水平上升。2.补肾填髓方干预AD细胞模型后,miRNA-206-3p mRNA表达水平下降,BDNF蛋白、BDNF mRNA表达水平上升。提示补肾填髓方可能通过下调miRNA-206-3p mRNA,增加BDNF mRNA从而提高BDNF蛋白的表达。