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证候是疾病发生发展不同阶段的病情动态时空变化的概括,是中医辨证论治的核心,证候研究是中医学术研究的中心。证候与疾病密不可分,研究证候离不开疾病,研究疾病也离不开证候,这是中医对疾病与证候关系的经典认识方法。脑梗死是临床常见疾病,气虚血瘀证可贯穿于该病全程。本课题以脑梗死气虚血瘀证为切入点,通过线栓法和力竭性游泳,把脑梗死模型与气虚血瘀证候模型复为一体,力求使气虚作为始动因素、主要因素而贯穿气虚血瘀模型的全过程,建立与临床原型相似的脑梗死气虚血瘀证的病证结合模型,比较观察模型动物气虚血瘀表征与生物学指标变化,进一步探索脑梗死气虚血瘀证模型动物的敏感表征与指标变化的关系,确立该模型的评价体系。1.目的:本实验拟以力竭性游泳复合线栓法复制脑梗死气虚血瘀证病证结合动物模型,探索病证结合动物模型的制作方法,通过对宏观表征、神经病学评分、脑组织病理变化及相关生化指标变化的观察,寻找表征与其他相关指标的关系,建立病证结合模型的评价体系。2.方法:健康雄性SD大鼠64只,体重(200±10)g,适应性喂养3天后,随机分为4组:正常组、单纯游泳组、单纯手术组、病证结合模型组,每组大鼠16只。正常组与单纯手术组正常喂养3周,不进行任何干预;单纯游泳组与病证结合模型组每天进行力竭性游泳训练,持续3周。3周后单纯手术组与病证结合模型组通过线栓法建立缺血2小时,再灌24小时的脑梗死模型。对比观察游泳与非游泳大鼠体重、进食量、活动量及手术死亡率;对比观察手术前后大鼠一般状态,术后6小时按照Zea-longa评分标准对大鼠进行神经症状体征评分;术后24小时:○1每组大鼠随机各取3只心脏灌注固定后取脑,再以4%的多聚甲醛固定1周后石蜡包埋制作患侧大脑冠状切片,进行常规HE染色后光镜观察脑组织形态学改变;○2剩余大鼠断头取脑,制成脑组织匀浆进行生化指标检测,包括:丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性测定,一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性测定,乳酸(LD)含量及乳酸脱氢酶酶(LDH)活性测定。所得数据用Excel软件处理,应用SPSS11.0软件行单因素方差分析。3.结果:通过三周游泳训练,单纯游泳组及病证结合模型组大鼠与正常组及单纯手术组相比,饮食量减少、体重增长缓慢;倦怠嗜睡,喜欠伸,攻击性、对抗性行为减少或消失;舌质明显暗淡,舌下脉络增粗,瘀紫。线栓法造成脑梗死模型后,单纯手术组死亡率(13%)明显低于病证结合模型组死亡率(37%),神经症状体征较轻;再灌24小时后,前组大鼠恢复好,活动能力较强。两组舌质较正常组更加黯淡,舌下脉络有不同程度的瘀紫,增长,但复合模型组舌象变化较单纯手术组明显。正常组及单纯游泳组大鼠脑组织无缺血损伤改变,但单纯游泳组大鼠脑组织血管增生明显;单纯手术组及复合模型组大鼠脑组织结构出现缺血性形态改变,复合模型组大鼠脑组织损伤更为严重。复合模型组脑组织中SOD活性(81.58±24.47)和单纯手术组脑组织中SOD活性(61.41±20.74)较正常组(106.66±6.40)显著降低P<0.05。复合模型组脑组织中脂质过氧化产物MDA的含量(1.26±0.19)和单纯手术组脑组织中脂质过氧化产物MDA含量(1.03±0.31)较正常组(0.0.64±0.07)明显增多(P<0.05)。4.结论:4.1在单次和反复多次力竭性游泳,造成气虚血瘀的基础上再复合脑梗死制作病证结合动物模型,从动物生活习性改变、一般状态改变,神经功能改变等表征观察,以及相关的病生理指标、生化指标检测,一定程度上综合模拟出脑梗死气虚血瘀证候特点。4.2从宏观表征和微观指标较为客观评价气虚血瘀状态和相关病生理基础变化,为建立病证结合的评价方法提供了依据。