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目的:建立经口来源的K1型肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)引起肝脓肿感染的动物模型,用454高通量测序检测K.pneumoniae引起的肝脓肿(K.pneumoniae-caused pyogenic liver abscess,KLA)感染小鼠肠道菌群结构,分析肠道菌群改变特点,探究KLA感染相关的肠道菌群结构特点。并用可恢复肠道菌群完整性的粪便移植(Fecal microbiota transplantation,FMT)方法对其进行干预,来探究粪便移植在KLA感染中的作用机制,为临床治疗提供理论依据。方法:1.构建KLA感染模型:选用6周龄C57BL/6雄鼠,10~6 CFU K1型K.pneumoniae菌株灌胃,构建感染模型。2.灌菌后48小时,解剖灌菌组与健康对照组小鼠,对小鼠血清进行肝功能检测及通过苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,HE)比较灌菌前后小鼠肝脏细胞的炎症状况,并将灌菌组小鼠分成KLA组、NonKLA组,收集盲肠内容物。3.提取盲肠内容物DNA,通过454高通量测序检测获得Healthy组、KLA组及NonKLA组小鼠肠道菌群变化情况。4.构建小鼠KLA感染模型同时进行粪便移植干预处理,粪便来自异体健康小鼠的新鲜晨便,制备300 mg/mL的粪便菌液。灌菌后24小时,0.3 mL/只粪便菌液灌胃一次。粪便移植24小时(灌菌48小时)后,解剖取材,将灌菌小鼠根据血清肝功能检测结果分成Kp1002+NonKLA组、Kp1002+FMT+NonKLA组。5.粪便移植对KLA感染率的影响:灌菌48小时(粪便移植24小时)后,取血进行肝功能检测,比较Kp1002组、Kp1002+FMT组小鼠KLA的感染率。6.酶联免疫吸附实验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测Blank组、Kp1002+NonKLA组、Kp1002+FMT+NonKLA组小鼠盲肠黏液中防御素、黏蛋白及免疫球蛋白浓度变化;胃黏液中防御素、黏蛋白的浓度变化;血清中炎症因子浓度变化。7.实时荧光定量聚合酶链式反应(Real time fluorescent quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-qPCR)及蛋白印迹法(Western blot,WB)检测各组小鼠结肠组织中白介素-1β(Interleukin 1 beta,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、黏蛋白2(Mucin 2,MUC2)的mRAN表达水平及其蛋白表达水平。结果:1.本研究采用基于细菌16S rRNA基因的V1-V3高变区的454高通量焦磷酸测序,证实K1血清型K.pneumoniae菌株经口灌胃后改变了KLA感染小鼠以及NonKLA小鼠盲肠内容物菌群组成。尤其是KLA感染小鼠乳酸菌属丰度降低(P<0.05),可能与KLA感染密切相关。2.粪便移植降低了K1血清型K.pneumoniae菌株经口灌胃后导致KLA的感染率。3.ELISA结果显示,粪便移植24小时后,与Kp1002+NonKLA组相比,Kp1002+FMT+NonKLA组小鼠盲肠黏液中β-防御素1、α-防御素6浓度降低,MUC2、分泌型免疫球蛋白A(Secretory IgA,SIgA)浓度升高;胃黏液中β-防御素1浓度降低;血清中IL-1β、TNF-α浓度降低;且均有统计学意义(P<0.05)。Kp1002+FMT+NonKLA组小鼠各因子浓度与Blank组无差异(P>0.05)。4.RT-qPCR及WB结果显示,粪便移植24小时后,与Kp1002+NonKLA组相比,Kp1002+FMT+NonKLA组小鼠结肠组织中IL-1β、TNF-α的mRNA及蛋白表达水平降低,MUC2的mRNA及蛋白表达水平升高;且均有统计学意义(P<0.05)。Kp1002+FMT+NonKLA组与Blank组相比IL-1β、TNF-α,MUC2的mRNA及蛋白表达水平无差异(P>0.05)。结论:1.K1型K.pnemouniae菌株在经口灌胃引起小鼠KLA感染的同时,也导致小鼠盲肠内容物菌群组成发生明显改变。尤其是在属的水平上,乳酸菌属在KLA感染小鼠的丰度明显降低,可能与KLA感染密切相关。2.K1型K.pnemouniae菌株在经口灌胃后给予粪便移植,明显降低KLA的感染率,同时改变了胃肠组织中防御素浓度,肠黏蛋白MUC2的表达,以及血清免疫因子的浓度,这些改变可能与粪便移植降低KLA感染率有密切关系。