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本文通过分子鉴定技术和传统鉴定技术的多相结合，探索从海洋浮游生物肠道内快速分离嗜酸乳杆菌的方法；然后对其细胞壁肽聚糖的结构进行系统研究，对其分子结构进行磷酸化修饰，以提高其水溶性和免疫调节活性；最后探讨修饰前后肽聚糖结构的变化和对巨噬细胞免疫因子的影响。主要研究内容如下：1.海洋源嗜酸乳杆菌的筛选及鉴定以不同来源的鱼肠内容物为原料，采用溴甲酚紫—MRS改良培养基进行初筛，得到28株乳酸菌疑似菌株。再利用生理生化和分子生物学手段，从28株疑似菌株中鉴定出2株嗜酸乳杆菌D1和B3。通过DPPH清除率实验，从2株目的菌株中选取较高清除率的菌株D1做进一步的探究。结果表明D1是一株具有高抗氧化能力，并对新霉素、菌必治、丁胺卡那霉素、庆大霉素等常见药物有一定耐药性的优良嗜酸乳杆菌。2.海洋源嗜酸乳杆菌肽聚糖的制备及其酶法水解以上述D1作为嗜酸乳杆菌研究菌种，利用传统的TCA法分离提取此菌的细胞壁肽聚糖。为了增加肽聚糖的溶解性以便其更好的发挥效益，将提取出的肽聚糖溶于变溶菌素-溶菌酶混合液中，以不溶物含量为指标，通过响应面法筛选出酶解的最佳工艺，并将原肽聚糖作为对照组，分析最佳工艺的抗氧化能力。结果分析得出嗜酸乳杆菌肽聚糖的最优酶解工艺为：变溶菌素/溶菌素(g:mg)的添加比例为20/1，酶解pH为6.00，酶解温度为41℃，酶解时间为16h。并且在提高超氧化物歧化酶的活力与抗超氧阴离子的能力上，酶解优化组制备的肽聚糖比原肽聚糖的效果更显著。3.海洋源嗜酸乳杆菌肽聚糖的磷酸化修饰及其结构分析在80℃的条件，采用混合磷酸盐（5％三聚磷酸钠，2％三偏磷酸钠，pH=6.0）对最优酶解工艺条件下制备出的小分子肽聚糖进行修饰，得到磷酸化肽聚糖。结合高效液相、核磁共振、红外光谱、电镜以及质谱对磷酸化肽聚糖的结构做进一步分析。结果表明肽聚糖磷酸化后其表面亲水性及粘附性均有一定增强，磷酸根连接于C环的OH根上，与文献报道的磷酸根共价修饰一致。4.海洋源磷酸化嗜酸乳杆菌肽聚糖的免疫效应研究以Raw264.7巨噬细胞为模型，依次将LPS（0.1g/ml）、肽聚糖（50g/ml）、不同浓度的磷酸化肽聚糖（25g/ml、50g/ml、100g/ml）注入已在六孔板内孵育的巨噬细胞培养液中，18小时后观察其细胞形态，用酶联免疫试剂盒检测上清液中IL-1α，TNF-α以及GM-CSF这三个细胞因子的含量，用溶酶体荧光探针法检测巨噬细胞溶酶体的变化情况。根据SPSS分析结果表明，磷酸化肽聚糖较同浓度的肽聚糖而言，能显著增加IL-1α，TNF-α以及GM-CSF这三个因子的分泌，且其分泌量与磷酸化肽聚糖浓度有一定相关性；通过倒置相差荧光显微镜的观察，发现肽聚糖和磷酸化肽聚糖组均能增加巨噬细胞分泌溶酶体的能力。