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目的: γδT细胞与支气管哮喘的慢性气道炎症的发生和发展密切相关,本研究旨在通过检测支气管哮喘患者外周血及气道内γδT细胞百分率,Vδ1~Vδ3亚群的表达和多态性,探讨γδT细胞在哮喘气道慢性炎症产生或延续机制中的作用,以期为支气管哮喘的新免疫疗法提供理论指导和实验依据。 方法: 我们选择间歇发作或轻~中度非急性发作期哮喘患者7例,年龄、性别相匹配的对照8例,其中2例偶尔痰带血丝但多项检查未见胸腔内病变,4例为早期的周围型肺癌患者,1例因左主支气管陈旧性内膜结核导致瘢痕狭窄,1例因食道反流导致慢性咳嗽。全部纳入的研究对象留清晨空腹外周血8ml,同时行纤维支气管镜检及支气管肺泡灌洗,计数灌洗液中细胞总数及分类计数。 实验方法为:(1)采用免疫荧光染色和流式细胞分析技术检测外周血及灌洗液中CD4+、CD8+T细胞和γδT细胞的百分率;(2)用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)法分析研究对象的外周血及灌洗液中T细胞受体Vδ基因(Vδ1~Vδ3)亚族的表达,并通过基因扫描分析确定各Vδ亚族的相对取用频率及T淋巴细胞的克隆状态;(3)对单克隆表达的Vδ基因,进一步行CDR3区片段的亚克隆及测序。 结果: 1)哮喘患者在纤维支气管镜直视下均可见气道粘膜炎症改变,支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞分类计数显示淋巴细胞及嗜酸细胞比例较对照明显增加。两组外周血及灌洗液中CD4+和CD8+T细胞亚群分布无显著差异。哮喘患者灌洗液中γδT细胞比例(7.8±4.7%)较对照组(3.1±2.5%)显著增加(p<0.05)。