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目的:在全世界范围内,结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)占据癌症发病率和死亡率第三位。目前在临床上,面临着个性化诊治、预测治疗结果和评估疾病预后等问题,因此,急需新颖和具体的生物标志物来提高疾病早期诊断的效果和改善患者预后。需要进一步研究生物标志物在结直肠癌进展中的机制和生物学功能。方法:在本研究中,通过非标记质谱(massspectrometry,MS)方法,进行结直肠癌和匹配的正常粘膜组织蛋白质组学分析,以寻找参与结直肠癌的发生发展的新靶点。通过蛋白质印迹和免疫组织化学验证差异表达的蛋白质。使用实时细胞分析仪和全内反射荧光显微镜研究细胞增殖迁移和细胞膜下l00nm内荧光变化,研究胰高血糖素在结直肠癌发生发展中的作用。结果:在六对结直肠癌组织中,共鉴定出169个显著差异表达的蛋白质。膜联蛋白 4(AnnexinA4,ANXA4),磷酸甘油酸激酶 l(phosphoglycerate kinase 1,PGK)和鸟苷三磷酸结合核蛋白(RAs-relatedNuclear,RAN)在结直肠癌组织中上调,比正常结直肠癌症组织表达高1.95,2.27和2.22倍。鸟苷三磷酸合成酶a亚基(ATP synthase subunit alpha，A-TP5A),钙网蛋白(calreticulin，CALR),钙调素依赖性蛋白激酶II(calmodulin-dependent protein kinase II,CAMKII)和胰高血糖素(Glucagon,GCG)的表达在结直肠癌中显著降低癌症组织相比蛋白表达高2.00,1.76,1.84和1.92倍(P<0.05)。此外,通过使用实时细胞检测技术,研究发现胰高血糖素抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移,在给予胰高血糖素药物50h后,相比对照组,胰高血糖素抑制结直肠癌细胞增殖 2.1 倍(SW480),1.4 倍(CT26);迁移 1.4 倍(SW480),1.9 倍(CT26),腺苷酸环化酶(adenylate cyclase,AC)抑制剂(2’5’-dideoxyadenosine,DDA)减轻了胰高血糖素对结直肠癌细胞抑制作用,进一步通过全内角反射荧光实验发现胰高血糖素激活AC,进一步激活钙库操作性钙离子通道(The store-operated Ca2+ entry,SOCE)并刺激结直肠癌细胞中的基质相互作用分子(stromal interactionmolecules,STIM1)易位,产生与环匹阿尼酸(cyclic adenosine monophosphate,CPA)类似的效应。结论:在结直肠癌进展中,胰高血糖素主要参与了第二信使cAMP/Ca2+信号转导途径,抑制结直肠癌细胞增殖和迁移,因此可能被用作治疗结直肠癌的新靶点。