第一部分、复方清热颗粒剂体内药效学实验研究　　 目的：观察中药复方清热颗粒剂治疗急性耐药菌感染药效学作用。　　 方法：采用腹腔注射耐药克雷白肝菌ATCC700603建立急性耐药菌腹腔感染兔动物模型，随机分为5组：空白对照组(A)、模型组(B)、中西药治疗组(复方清热颗粒剂+头孢地尼)(C)、西药治疗组(头孢地尼)(D)、中药治疗组(复方清热颗粒剂)(E)。造模成功后各治疗组即开始每日分2次灌胃给药，连续共5天。治疗前后观察各组兔的行为表现、测量呼吸频率(R)、心率(HR)、体温(T)、体重(W)，于给药前及5天结束时禁食12小时后心脏采血测定血常规、肝肾功能、中性粒细胞吞噬指数、血浆内毒素、白介素-10(IL-10)/肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、腹腔菌落计数等指标。处死前留取中药复方清热颗粒剂含药血清、空白血清。处死后留取病理标本。　　 结果：1、复方清热颗粒剂能显著降低耐药菌感染动物体温，缓解呼吸急促，同西药头孢地尼疗效相同，二者结合治疗效果显著优于单独使用(P＜0.05)；配合抗菌药物则能够恢复外周血白细胞正常水平，显著降低心率，改善摄食状态，增加体重；2、复方清热颗粒剂治疗组动物腹腔菌落计数显著低于模型组(P＜0.01)，但明显高于西药治疗组(P＜0.01)，中西药结合使用腹腔菌落计数同空白对照组无差异(P＞0.05)；3、兔腹腔耐药菌感染后后4h之内，肝、肾功能与距常组相比均无显著改变(P＞0.05)。5天后，模型组兔血尿素氮(BUN)显著高于正常组、治疗组(P＜0.05)，出现氮质血症；治疗组保持正常水平，组间比较无统计学差异(P＞0.05)；4、治疗后中药复方清热颗粒剂组血浆内毒素，细胞因子IL-10、TNF-α水平恢复正常，显著低于模型组(P＜0.05)，同时中性粒细胞吞噬指数高于模型组(P＜0.01)，同西药、中西药组比较没有显著性差异(P＞0.05)；5、复方清热颗粒剂组动物腹腔脏器各类型病理损伤较模型组均减轻，同西药组和中西药组间差异不显著；6、中西药治疗组病死率为0，显著低于模型组50％(P＜0.05)，中药组和西药组病死率无显著性差异(P＞0.05)。　　 结论：1.中药复方清热颗粒剂对耐药菌具有一定杀灭作用，弱于西药抗生素，但能协助抗生素提高对耐药菌的杀灭作用；　　 2.中药复方清热颗粒剂能够消除耐药菌感染血浆内毒素，降低其诱导产生的细胞因子水平，从而改善过度炎症反应和对组织器官的损伤；　　 3.中药复方清热颗粒剂调节感染状态下兔抗炎、促炎细胞因子水平的表达，提高中性粒细胞吞噬指数等非特异性免疫水平；　　 4.中药复方清热颗粒剂能够减轻急性耐药菌腹腔感染动物脏器组织的病理损伤；　　 5.中药复方清热颗粒剂能够降低急性耐药菌腹腔感染动物的病死率。　　 第二部分、体外血清药理学抗细菌耐药性作用机理研究　　 目的：研究中药复方清热颗粒剂抗细菌耐药性的作用机制　　 方法：依据给药后不同时间采血所得含药血清对大肠杆菌ATCC25922的体外抑菌作用呈明显的时效关系，采取抑菌作用最强的中药复方清热颗粒剂含药血清用于后续实验研究。实验一细菌耐药性的诱导实验：采用血清药理学方法，在中药复方清热颗粒剂含药血清和低浓度新霉素条件下传代培养大肠杆菌ATCC25922，以空白血清、低浓度新霉素、空白肉汤作对照，采用纸片扩散法(KB法)，抑菌环直径(mm)作为衡量标准，动态观察诱导菌株耐药性变化；实验二β-内酰胺酶的抑制实验：采用紫外分光光度法，测定不同浓度的复方清热颗粒剂含药血清对肺炎克雷伯杆菌ATCC700603β-内酰胺酶提取液活性的抑制作用，以空白血清、空白磷酸缓冲液为对照，以底物氨苄西林紫外吸光度(OD)变化为指标，观察中药复方清热颗粒剂含药血清对β-内酰胺酶抑制作用；实验三R质粒的体外消除作用实验：中药复方清热颗粒剂及其含药血清作为消除剂，对产ESBLs肺炎克雷伯杆菌ATCC700603R质粒进行体外消除，采用抗生素平板法筛选耐药质粒消除子，0.7％琼脂糖凝胶电泳分离鉴定质粒DNA，抗生素最低抑菌浓度(MIC)为指标，测定筛选菌株耐药性变化。　　 结果：1、复方清热颗粒剂含药血清对大肠杆菌ATCC25922具有直接抑菌作用，末次给药60min后其抑菌环直径达10mm；2、经低浓度新霉素诱导30代后，大肠杆菌ATCC25922不仅对新霉素产生耐药，而且导致丁胺卡那、氨苄西林失效，对庆大霉素、链霉素敏感性降低，产生多重耐药；新霉素+含药血清组菌株第40代菌株对新霉素产生耐药性，对丁胺卡那、氨苄西林、庆大霉素、链霉素始终保持敏感，其中氨苄西林的敏感性同空白肉汤组保持一致(P＞0.05)3、复方清热颗粒剂33.33％含药血清对ATCC700603产β-内酰胺酶抑酶率超过50％，抑酶效果与血清浓度呈正相关(P＜0.05)，与对照组有显著性差异(P＜0.01)；4、含药血清对肺炎克雷伯杆菌ATCC700603耐药菌株R质粒无消除作用，未发现消除子，MIC无变化；5、经中药最低抑菌浓度作用48小时后，产生头孢唑啉消除子，消除率为30.56％，消除子质粒电泳条带亮度明显减弱，该筛选菌株MIC减小，敏感性增强；作用72小时后，头孢唑啉、头孢他啶平板实验证实有消除子，消除率分别为64.56％和83.72％；头孢他啶、头孢唑啉消除子质粒电泳条带亮度明显减弱，对抗生素敏感性增强。　　 结论：1、复方清热颗粒剂具有延缓和控制细菌在低浓度抗生素诱导下产生耐药性，以及多重耐药作用；2、中药复方清热颗粒剂能够有效抑制ESBL活性是其抗产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯杆菌急性感染的机制之一；3、复方清热颗粒剂原液最低抑菌浓度能够减弱头孢唑啉、头孢他啶耐药质粒表达，使其对头孢唑啉、头孢他啶耐药性减弱；4、复方清热颗粒剂含药血清未发现耐药质粒消除作用，与中药成分复杂，作用环节多，体内吸收代谢过程释放的各种有效成分时效关系不同有关；