目的：构建可进行细胞转染的pEGFP-C₁-KLF6质粒载体并转染膀胱癌BIU-87细胞，并研究其转染情况，有助于后续实验的进行，同时可为膀胱癌的基因治疗提供新的选择。方法：1、目的基因的获取及质粒的构建：提取RNA并设计KLF6的引物序列，RT-PCR克隆目的基因，BamH I和EcoR I双酶切KLF6和质粒载体pEGFP-C₁后进行连接反应，构建含有目的基因KLF6的重组质粒pEGFP-C₁-KLF6；2、质粒扩增及转染：对重组pEGFP-C₁-KLF6质粒进行扩增，以达到实验所需要的数量并进行纯化。采用阳离子脂质体介导将含或不含KLF6的质粒转染入BIU-87细胞，分别作为转染组和空载体组，对照组选用未转染的BIU-87细胞；3、 RT-PCR和Western检测转染后KLF6mRNA和蛋白的表达水平。结果：1、成功获得目的基因并构建pEGFP-C₁-KLF6质粒，使其可进行细胞转染和实验使用。2、重组质粒经过扩增、抽提并纯化，经电泳检验与扩增前重组pEGFP-C₁-KLF6质粒位置一样。3、实验的对照组及空载体组在荧光显微镜下观察未见荧光，转染组在荧光显微镜下可见60％左右细胞内具有绿色荧光。4、RT-PCR和Western实验均可检测到转染组KLF6mRNA和蛋白的表达，而对照组和空载体组则未见明显表达。结论：1、构建成功的pEGFP-C₁-KLF6质粒载体，具备进行细胞转染的特点。通过感受态细菌的转化、扩增，分离和纯化重组pEGFP-C₁-KLF6质粒DNA，获得了足够的重组pEGFP-C₁-KLF6质粒进行实验。2、脂质体2000能够介导重组质粒转染入膀胱癌BIU-87细胞，为进一步研究奠定基础。