论文部分内容阅读
真姬菇又名斑玉蕈,蟹味菇,隶属伞菌目,口蘑科,玉蕈属。由于其出菇周期长、生物学效率低、易受霉菌污染等问题,在一定程度上限制了其规模化生产。本研究通过对真姬菇采用酶学与原生质体融合技术相结合的方法,从而提高真姬菇对原材料的利用率,加强其抑制杂菌能力和缩短出菇周期。首先,通过对32种食用菌品种进行木素氧化酶系定性定量检测,筛选出大杯蕈(鲁),同时以真姬菇9602作为实验材料,将高温灭活的大杯蕈(鲁)原生质体与真姬菇9602原生质体融合,建立真姬菇育种中木素氧化酶系转化体系。通过RB-PDA平板显色技术和苯胺蓝平板显色技术,筛选出具有木素氧化酶系活性较高的四个融合菌株ⅠM1、ⅡM1、ⅢM3和IIIM5。再次,融合菌种ⅠM1、ⅡM1、ⅢM3和IIIM5与两亲本的形态学特性比较发现, IM1和IIIM5类似真姬菇具有明显的锁状联合和典型的双核多细胞且菌丝直径比较细；四个融合菌株与两亲本间有明显的拮抗线,四个融合菌株之间也存在拮抗线。RAPD-PCR和ISSR-PCR扩增结果显示,ⅠM1, ⅢM5不仅具有与两亲本相同的条带,而且出现了新的条带,但两融合菌株与真姬菇的相似性较高,亲缘关系更近,且两融合菌株之间也存在差异,而ⅡM1、ⅢM3与真姬菇条带相同。通过对四个融合菌株进行鉴定,进一步筛选出新的融合菌株IM1和IIIM5。最后,IM1和IIIM5的生物学特性结果表明,两个融合菌株菌丝最适生长温度24℃。IM1和IIIM5最适酸碱度与大杯蕈相同,在PDA平板上最适pH 8.0,在栽培料中,最适生石灰量为2%。真姬菇最适酸碱度,在PDA中最pH值为7.0,在栽培料中,最适生石灰量1%。同时发现,Ca2+可以促进菌丝的生长。添加碳源、氮源和离子对融合菌株和两亲本菌丝生长速度和菌丝形态影响较大,其中以葡萄糖为碳源,牛肉膏为氮源和以K：Mg(2：1)为离子组合时,融合菌株和真姬菇菌丝生长都很快且菌丝洁白浓密。融合菌株最在栽培料中适含水量为60%-65%。IMI和IIIM5的生物学效率分别比真姬菇提高了14.58%和4.67%,同时IM1,出菇周期缩短4-6天且出菇整齐,‘商品性状明显优于真姬菇,表现出良好的生产应用价值,而融合菌株IIM1生物学效率低于真姬菇,只有17.28%,说明由于融合随机性既可以出现生产性状好的菌株也可能出现生产性状差的菌株。