论文部分内容阅读
研究背景近年来,随着生活水平的提高和老龄化速度的加快,我国前列腺癌发病率及死亡率明显上升,而检测前列腺癌的实验室指标PSA灵敏度及特异性不高,因此需要寻求新的肿瘤标记物。基因芯片技术具有高通量、高特异性等特点,在疾病诊断等领域应用前景广泛,但是目前主要基因芯片技术均存在着检测仪器昂贵或灵敏度较低等问题,从而限制该技术的进一步发展。本研究利用纳米金可以与银结合后形成体积为原来106倍的黑色颗粒,并且可以凭肉眼观察,普通扫描仪读取图像的特点,将纳米金应用于基因芯片检测技术。目的1、研制纳米金标记芯片技术。2、建立一种可靠的前列腺癌纳米金标记基因芯片诊断系统。3、用纳米金标记芯片对临床前列腺癌标本进行验证。方法首先建立定性检测的纳米金标记芯片技术,并对11个前列腺癌特异性基因靶标(IGF1、P27、AR、PSMA、KLK3、PCNA、Ki-67、KLK1、KLK2、TMPRSS2、SREBF2)及前列腺癌临床标本进行检测,对各基因表达进行研究。结果结果表明,纳米金标记基因芯片检测单链核酸的灵敏度达到80 fmol/L,使用50%DMSO作为点样液效果最好,预杂交会导致杂交信号降低70%,银染时间控制在15 min时显色清晰且背景较低。在优化条件下,目标上调基因呈阳性表达,且颜色深浅不同,下调及阴性对照无显色,可肉眼分辨,达到定性及半定量结果。结论1、在优化条件下,纳米金标基因芯片的最佳点样液是50%DMSO,预杂交会导致杂交信号降低70%,银染时间控制在15 min时显色清晰且背景较低,检测单链核酸的灵敏度达到80 fmol/L。可作为一种相对可靠的基因芯片检测平台,具有灵敏度高、特异性好的特点,费用便宜,可用于临床检测。2、对11个前列腺癌特异性基因靶标(IGF1、P27、AR、PSMA、KLK3、PCNA、Ki-67、KLK1、KLK2、TMPRSS2、SREBF2)及前列腺癌临床标本进行检测,阴性对照及下调基因P27无显色,上调基因(IGF1、AR、PSMA、KLK3、PCNA、Ki-67、KLK1、KLK2、TMPRSS2、SREBF2 )探针呈现出明显显色点,且颜色深浅不同,可达到定性及半定量结果,且灵敏度高、特异性好。因此可以作为一种前列腺肿瘤早期诊断的重要参考组合指标,应用于临床前列腺癌检测。