结缔组织生长因子诱导人增生性瘢痕成纤维细胞转分化的研究

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目的:目前实验研究表明,病理性瘢痕的形成可能是成纤维细胞向肌成纤维细胞(MyoF)转分化,并且后者持续存在的结果。转化生长因子-β1(TGF-β1)被认为是促进纤维化发展的最重要的生长因子,具有促进成纤维细胞分化的作用,但阻断其表达而带来的负作用也异常明显,结缔组织生长因子(CTGF)于1991年发现,被认为是TGF-β1的下游效应因子,主要在间质细胞中表达,是一种特异性更强的促纤维化因子,本文旨在探讨结缔组织生长因子是否也具有促进瘢痕成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化的作用,且与TGF-β1之间的关系如何,为增生性瘢痕(HS)的防治研究拓展新的领域。方法:原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞(HSF),分别向其培养基内单独或同时加入不同浓度的TGF-β1和CTGF,通过CTGF反义寡核苷酸转染,以及先转染后再加入TGF-β1刺激,使用倒置显微镜、免疫细胞化学、Western-blot、流式细胞术等方法对人增生性瘢痕成纤维细胞向肌成纤维细胞形态及表型的转变进行评估。结果:不同浓度CTGF及TGF-β1作用48h后,各浓度组HSF细胞形态均呈现出不同程度的改变,其中以CTGF和TGF-β1联合刺激组最为明显;首先,细胞排列紊乱,不再具有一定的方向性;其次,形态不规则细胞增多,胞体肥大,呈多极性,胞核表面呈锯齿状;第三,α-SMA免疫细胞化学染色发现阳性细胞增多。Western-blot结果显示,对照组HSF表达少量α-SMA,不同浓度CTGF及TGF-β1作用于HSF后都能使α-SMA表达增加(P<0.05),且呈一定的浓度依赖性变化,当CTGF浓度为7.5ng/ml,TGF-β1浓度为10ng/ml时,α-SMA表达最强,且随着浓度升高,α-SMA蛋白表达逐渐趋于稳定,二者联合刺激组更为明显,而CTGF ASODN转染组α-SMA表达与对照组比较无统计学意义(P>0.05), CTGF ASODN转染后TGF-β1再刺激组与TGF-β1单独刺激组相比较,差异显著(P<0.05)。流式细胞术结果显示,当加入CTGF和TGF-β1刺激后,流式细胞仪均检测出α-SMA染色阳性的细胞,对照组α-SMA阳性细胞百分率为10.76±2.81%,CTGF刺激组和TGF-β1刺激组α-SMA阳性细胞百分率分别为29.13±4.01%和28.74±4.75
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