论文部分内容阅读
目的：检测肝细胞癌(HCC)患者和健康者血浆中载脂蛋白M（apoM）的表达水平；同时，检测正常肝组织、癌旁组织和肝细胞癌组织中 apoM、肝受体同系物1（LRH-1）、肝细胞核因子1α（HNF-1α）的表达；运用RNAi技术观察干扰HepG2细胞内HNF-1α后apoM及其相关脂蛋白apoA-I、FXR、SHP-1、HMGCR、CYP7A1的变化，探讨肝细胞癌中apoM的表达及apoM表达水平与LRH-1、HNF-1α表达水平的相关性，及影响apoM表达的分子机制。 方法：运用western blot检测血浆中apoM水平；采用RT-PCR方法检测肝细胞癌和癌旁组织中apoM、LRH-1、HNF-1αmRNA水平表达；运用免疫组织化学方法检测肝细胞癌、癌旁组织和正常肝组织中apoM、HNF-1α蛋白水平的表达，比较肝细胞癌、癌旁组织和正常肝组织中apoM、LRH-1、HNF-1α的表达水平，分析LRH-1、HNF-1α与apoM的相关性；采用RNAi技术，体外观察HNF-1α对apoM及其相关脂蛋白apoA-I、FXR、SHP-1、HMGCR、CYP7A1表达的影响。 结果：肝细胞癌患者血浆中apoM的蛋白水平明显高于健康者(P<0.01)；apoM、LRH-1和HNF-1α mRNA在肝细胞癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.01)，apoM、HNF-1α蛋白在肝细胞癌组织中的表达亦明显高于癌旁组织(P<0.05),癌旁组织中apoM蛋白表达高于正常肝组织(P<0.05)，HNF-1α蛋白在癌旁组织与正常肝组织表达无统计学差异(P>0.05)；肝细胞癌和癌旁组织中LRH-1、HNF-1α和apoM mRNA表达存在显著相关性（P<0.01）；采用RNAi技术成功干扰HNF-1α在HepG2细胞中的表达，干扰效率在mRNA和蛋白水平分别为：76.3％、78.4%；RT-PCR结果显示，干扰HNF-1α能明显抑制apoM、FXR、SHP-1 mNRA的表达，与阴性对照相比分别下降：47.4%、47.9%、65.2%（p<0.01），增强HMGCR、CYP7A1 mRNA的表达，与阴性对照相比分别增高：101.1%、138.5%（p<0.01），而在 mRNA水平对apoA-I的表达无明显影响（p>0.05）。 结论：肝细胞癌患者血浆中apoM表达水平明显高于健康者；apoM在肝细胞癌组织、癌旁组织和正常肝组织中表达具有显著性差异，且 LRH-1、HNF-1α与 apoM表达存在正相关性；HNF-1α是apoM表达和胆固醇合成与转化的重要转录调节因子。