【摘 要】
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目的:观察荆芥挥发油及其主要成分胡薄荷酮、薄荷酮体外对甲型流感病毒鼠肺适应株 A/PR/8/34(H1N1)在感染细胞中增殖的影响,并探讨其抗病毒效应的TLR/IFN信号机制,以期为荆芥挥发
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目的:观察荆芥挥发油及其主要成分胡薄荷酮、薄荷酮体外对甲型流感病毒鼠肺适应株 A/PR/8/34(H1N1)在感染细胞中增殖的影响,并探讨其抗病毒效应的TLR/IFN信号机制,以期为荆芥挥发油的临床应用提供科学实验依据。 方法:①采用 MTT法和细胞病变法(CPE)检测药物对狗肾传代细胞(MDCK)的半数中毒浓度(TC50)及最大无毒浓度(TC0)。②红细胞凝集试验(血凝试验)检测甲型流感病毒鼠肺适应株 A/PR/8/34(H1N1)滴度,根据Reed-Menuch法计算半数感染剂量(TCID50)。③MTT法和CPE法测定药物体外抑制流感病毒增殖的半数有效浓度(IC50)和治疗指数(TI)。④MTT法和CPE法测定药物对病毒直接杀灭作用的IC50和TI。⑤Real-Time qRT-PCR法检测药物对H1N1感染MDCK细胞后8h细胞TLR7、IRAK4、TLR3、TRAF3和IFN-β mRNA表达水平的影响。⑤ELISA法检测药物对H1N1感染MDCK细胞后8h细胞上清液中IFN-β水平的影响 结果:①荆芥挥发油、胡薄荷酮和薄荷酮对 MDCK细胞的TC50分别为0.203mg/ml、0.358mg/ml与0.425mg/ml,TC0分别为0.1mg/ml、0.1mg/ml与0.25mg/ml。②荆芥挥发油和胡薄荷酮(3.13×10-3~0.1mg/ml)对流感病毒细胞内增殖有抑制作用,其IC50分别为1.68×10-3mg/ml与1.94×10-3mg/ml,TI分别为120.83、184.54,呈一定剂量依赖性;薄荷酮对流感病毒细胞内的增殖几乎无抑制作用。③荆芥挥发油(3.13×10-3~0.1mg/ml)、胡薄荷酮(1.25×10-2~0.1mg/ml)及薄荷酮(7.8×10-3~0.1mg/ml)对流感病毒具有明显直接杀灭作用,其IC50分别为3.12×10-3、7.16×10-3与1.94×10-3mg/ml,TI分别为63.99、50.00和82.88,呈一定剂量依赖性。④与病毒对照组相比,荆芥挥发油0.1mg/ml浓度能显著提高染毒MDCK细胞内TLR7、IRAK4、TRAF3和IFN-βmRNA表达水平(P<0.001);胡薄荷酮0.1mg/ml浓度显著提高染毒MDCK细胞内TLR7、IFN-β(P<0.001)和IRAK4 mRNA(P<0.01)表达水平;薄荷酮0.25mg/ml浓度一方面能提高染毒MDCK细胞内TLR7和IRAK4 mRNA表达水平(P<0.05),另一方面显著降低TLR3 mRNA表达水平(P<0.001)。⑤与病毒对照组相比,荆芥挥发油和胡薄荷酮0.1mg/ml浓度均能显著提高染毒 MDCK细胞上清液中IFN-β水平(P<0.001)。 结论:荆芥挥发油与胡薄荷酮体外对甲型流感病毒(H1N1)在 MDCK细胞中的增殖具有明显抑制作用,薄荷酮作用不明显;三者均表现出对流感病毒的直接杀灭作用。荆芥挥发油和胡薄荷酮抗病毒作用机制可能与激活 TLR7信号通路,活化通路中相关关键分子IRAK4,诱导IFN-β高表达,启动病毒模式识别系统有关;薄荷酮抗病毒机制较前两者复杂,能激活 TLR7信号通路,提高通路中IRAK4的表达,但对TLR3信号通路呈现抑制作用。
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