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猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸征病毒(PRRSV)引起的高度接触性病毒传染病,以妊娠母猪、公猪生殖障碍及仔猪呼吸障碍为特征的疾病,是严重危害全球养猪业的疾病之一。该病毒PRRSV可分为美洲型和欧洲型,我国现存的PRRSV大多数为美洲型PRRSV.本研究建立了四种美洲型病毒的病原学诊断方法,并对它们进行了系统分析。研究表明N蛋白是PRRSV病毒粒子中含量最多的病毒蛋白,也是免疫原性最强的蛋白。本研究应用抗PRRSVN多抗,初步建立了PRRSV ELISA(?)PRRSV IFA检测方法,用于病毒的检测。本实验所建立的ELISA方法,最佳病毒包被稀释度为1/20(此时包被的病毒量为0.093μg/μL),最佳的一抗(抗PRRSV多克隆抗体)稀释度为1/400。在ELISA特异性实验中,只有PRRSV病毒样品,结果为阳性,猪细小病毒阳性样品、猪伪狂犬病毒样品、猪圆环病毒样品,结果均为阴性。在临床样品的检测过程中,ELISA方法的检出率为20%,与标准通用的RT-PCR检测结果要高；IFA方法在接种300个TCID50细胞毒/100μL情况下,最佳一抗二抗稀释倍数分别为1/400,1/400,此方法在临床样品的检测过程中,检出率为7.5%,与标准检测结果差距较大,表明此方法并不是很敏感。本实验参照美洲型PRRSV NSP2基因序列,设计RT-PCR引物和RT-LAMP(?)物,建立RT-PCR和(?)RT-LAMP检测方法,用于PRRS病毒的检测与区分。在灵敏性实验中,我们对梯度稀释的病毒RNA(从病毒液中提取的),分别进行检测,结果可知该RT-LAMP检测方法的敏感性比普通的RT-PCR高103-104倍。本实验所建立的RT-LAMP方法最低检测限量为7.9×10-11μg/μL和8.3×10-10μg/μL病毒RNA,而RT-PCR方法最低检测限量为7.9×10-6μg/μL和8.3×10-7μg/μL病毒RNA。在特异性实验中,两种检测方法可以准确的区分PRRSV和其他猪病病毒,更能准确的区分强弱PRRSV。对40份临床样本进行的检测应用中,ELISA, RT-LAMP和RT-PCF(?)检测结果分别为：阳性样品4,阴性样品36；阳性样品5,阴性样品35；阳性样本5,阴性样本35。RT-LAMP, RT-PCR结果与病毒分离结果和(?)RT-PCR通用引物扩增的结果相同。与ELISA1(?)IFA检测方法相比较,病毒核酸检测方法的准确性和检出率都比较理想,并且更加省时方便,可作为有效的候选检测PRRS的手段。