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V-ATPase水解ATP产生的能量将中肠腔内H+运输到细胞中，维持中肠腔内的碱性环境，对昆虫生长、发育和生殖发挥重要作用，例如:对玉米根虫（Diabrotica virgifera virgifera）饲喂V-ATPase A亚基dsRNA，害虫死亡率增加[40]，东亚飞蝗V-ATPase H亚基基因的沉默会导致害虫个体出现死亡和显著的蜕皮缺陷表型[51]，这些有实践意义的研究使我们高度关注V-ATPase各亚基的分子结构和功能。本实验选择重要害虫棉铃虫为研究对象，筛选并克隆该虫V-ATPase重要亚基A、B、C和H基因，并对棉铃虫不同虫态V-ATPase亚基A、B、C和H基因的表达量进行了初步比较，主要研究结果如下: (1)通过特异性引物PCR扩增，克隆出编码棉铃虫V-ATPase亚基A、B、C和H基因的cDNA序列，A亚基cDNA序列开放阅读框长度为1863bp，编码620个氨基酸，预测分子量和等电点分别为68kD和4.92，由系统发育树和序列一致性分析可知:棉铃虫V-ATPaseA亚基与家蚕的亲缘关系最近，其氨基酸序列的一致性也很高，达96％;B亚基cDNA序列开放阅读框长度为1485bp，编码494个氨基酸，预测分子量和等电点分别为55kD和4.98，B亚基与烟蚜夜蛾的亲缘关系最近，其氨基酸序列的一致性也很高，达99％;C亚基cDNA序列开放阅读框长度为1155bp，编码384个氨基酸，预测分子量和等电点分别为44kD和8.66，C亚基与烟草天蛾的亲缘关系最近，其氨基酸序列的一致性也很高，达87％;H亚基cDNA序列开放阅读框长度为1428bp，编码475个氨基酸，预测分子量和等电点分别为55kD和6.80，H亚基与烟草天蛾和家蚕的亲缘关系最近，其氨基酸序列的一致性也很高，达93％。 (2)荧光定量PCR结果表明:V-ATPase亚基A、B、C和H基因广泛存在于棉铃虫的各个虫态，表达量存在显著差异;A亚基在棉铃虫1龄的表达量最高，雄蛾和雌蛾次之，雌蛹和雄蛹的表达量最低;B亚基在棉铃虫雄蛾和雌蛾的表达量最高，1龄次之，雄蛹的表达量最低;V-ATPase亚基A、B基因在棉铃虫雌虫、雄虫各个虫态的相对表达量趋势大致相同，表明催化结构域A3B3的组成亚基A和B，其在结构和功能上是紧密联系的。C亚基表达量从高到低排序为6龄、雄蛾、5龄、雌蛾、1龄、4龄、卵、2龄、雌蛹、3龄、雄蛹，H亚基表达量从高到低排序为雄蛾、6龄、雌蛾、1龄、4龄、5龄、2龄、雌蛹、3龄、卵、雄蛹;V-ATPase亚基C、H基因在棉铃虫雌虫、雄虫各个虫态的相对表达量趋势大致相同，表明两亚基在功能上是相关联的。 以上研究结果将为后续进行干扰研究提供参考，如果能较好沉默V-ATPase靶基因且棉铃虫死亡率或畸形率上升，那么应用干扰技术防控棉铃虫将是一个非常好的措施，对延缓害虫抗药性是非常有益的。